三氯乙烯致皮肤角质形成细胞损伤及维生素E、银杏叶提取物保护作用的体外研究

论文题目: 三氯乙烯致皮肤角质形成细胞损伤及维生素E、银杏叶提取物保护作用的体外研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 皮肤病与性病学

作者: 朱启星

导师: 张学军,杨森

关键词: 三氯乙烯,角质形成细胞,氧化应激,一氧化氮,细胞凋亡,维生素,银杏叶提取物

文献来源: 安徽医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）是常用的有机溶剂,主要用于金属去污、脱脂和干洗等。工人在操作中皮肤直接接触TCE引起的损害,在包括中国在内的发展中国家很普遍,已引起职业卫生界的广泛关注。但其皮肤损害作用的具体机制和有效的保护措施研究不够,限制了TCE引起的职业性皮肤损伤防治工作的开展。皮肤角质形成细胞（keratinocyte,KC）是人体表皮屏障的主要构成细胞,其在皮肤与外源性化合物接触中首当其冲。角质形成细胞的损伤与多种皮肤疾病的发生与发展相关。因此,研究TCE对皮肤角质形成细胞损伤及其有效的保护因素,可为进一步了解TCE对皮肤损害作用及其机制,并为TCE皮肤损害的防治提供参考依据。本研究利用体外无血清培养的正常人角质形成细胞测试系统,采用细胞、分子毒理学方法,研究TCE致角质形成细胞膜损伤、细胞氧化应激,NO和NOS活力及NOS mRNA表达水平、细胞亚微结构和细胞凋亡等指标的改变,探索TCE引起刺激性接触性皮炎的发病机制及其抗氧化剂维生素E（VitE,α—生育酚）和银杏叶提取物（ginkgo biloba leaf extracts,EGb）拮抗TCE细胞毒性作用。 目的 研究常用有机溶剂TCE对体外培养的人皮肤角质形成细胞的细胞毒性,探讨TCE致角质形成细胞损伤机制;并观察抗氧化剂Vit E和EGb对TCE所致的角质形成细胞损伤的保护作用。 方法 用胰蛋白酶经冷和温两步消化法分离人正常皮肤的角质形成细胞,进行体外无血清培养。将来自3个以上不同个体的角质形成细胞混合,在加与不加抗氧化剂维生素E或银杏叶提取物情况下,分别用中性红吸附试验（NRU）测定TCE的NR50并

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论文正文：三氯乙烯致皮肤角质形成细胞损伤及维生素E、银杏叶提取物保护作用的体外研究

1.前言

2.材料和方法

2.1 试剂和材料

2.2 人皮肤角质形成细胞的培养、鉴定

2.3 角质形成细胞混合培养研究

2.4 中性红吸附实验

2.5 染毒剂量的确定

2.6 乳酸脱氢酶释放实验

2.7 氧化应激检测

2.8 NO、NOS水平检测

2.9 iNOS和cNOS mRNA表达水平检测

2.9.1 细胞总RNA的提取

2.9.2 RT反应

2.9.3 PCR反应

2.10 细胞凋亡检测

2.10.1 DNA降解梯级(Ladder)实验

2.10.2 透射电子显微镜观察形态学改变

2.10.3 流式细胞仪测定细胞DNA含量

2.10.4 细胞周期动力学分析

2.11 维生素E、银杏叶提取物对TCE引起的角质形成细胞损害的保护作用

2.11.1 中性红吸附实验

2.11.2 维生素E、银杏叶提取物对细胞膜损伤的保护作用

2.11.3 维生素E、银杏叶提取物对细胞氧化应激的保护作用

2.11.4 维生素E、银杏叶提取物对TCE致KC NO、NOS升高和NOS mRNA表达上调的保护作用

2.11.5 维生素E、银杏叶提取物对细胞凋亡的保护作用

2.12 数据处理与分析

3.结果

3.1 人皮肤角质形成细胞的培养、鉴定

3.1.1 角质形成细胞的分离培养

3.1.2 角质形成细胞的鉴定

3.1.3 角质形成细胞生长情况

3.2 TCE的NR_(50)测定结果

3.3 TCE对皮肤角质形成细胞损伤

3.3.1 TCE对角质形成细胞细胞膜损伤

3.3.2 TCE对角质形成细胞氧化应激的影响

3.4 TCE对皮肤角质形成细胞的凋亡诱导作用

3.4.1 Ladder实验检测DNA降解

3.4.2 TCE对角质形成细胞亚微结构的影响

3.4.3 TCE对皮肤角质形成细胞凋亡率的影响

3.4.4 TCE对角质形成细胞周期动力学的影响

3.5 银杏叶提取物对TCE引起的角质形成细胞损伤的保护作用

3.5.1 银杏叶提取物对TCE引起的角质形成细胞活力降低的保护作用

3.5.2 银杏叶提取物对TCE引起的角质形成细胞膜损伤的保护作用

3.5.3 银杏叶提取物对TCE诱导的角质形成细胞氧化应激增高的影响

3.5.4 银杏叶提取物对TCE诱导的皮肤角质形成细胞凋亡的保护作用

3.6 维生素E对TCE诱导的皮肤角质形成细胞损伤的保护作用

3.6.1 维生素E对TCE引起的角质形成细胞活力降低的保护作用

3.6.2 维生素E对TCE引起的角质形成细胞膜损伤的保护作用

3.6.3 维生素E对TCE致KC氧化应激增高的影响

3.6.4 维生素E对TCE诱导皮肤角质形成细胞凋亡的保护作用

4.讨论

5.结论

6.论文的创新性

7.参考文献

8.附录

8.1 个人简历

8.2 学习期间承担的科研课题

8.3 学习期间出版专著、教材以及发表论文

8.4 致谢

附件一：皮肤角质形成细胞凋亡及其调控(综述)

附件二：Cytotoxicity of Trichloroethylene and Perchloroethylene on Normal Human Epidermal Keratinocytes and Protective Role of Vitamin E. Toxicology, 2005; 209: 55—67

附件三：Protective Effects of Ginkgo Biloba Leaf Extracts on Trichloroethylene-induced Human Keratinocyte Cytotoxicity 《Skin Pharmacology and Physiology》 inpress (2005)

发布时间: 2005-09-07

参考文献

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