丝裂霉素诱导原头蚴体细胞凋亡的体外研究

论文摘要

目的:研究丝裂霉素体外诱导原头蚴体细胞发生细胞凋亡的现象。方法:应用玻璃匀浆器轻研磨法和0.25%胰蛋白酶4℃消化约4～6h后,获得原头蚴体细胞。MTT法筛选出丝裂霉素合适的浓度范围后,按此浓度范围将体细胞分为6组,组间浓度差为10μmol几。应用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳法、荧光显微镜和原位末端标记法(TUNEL法)综合检测不同浓度的丝裂霉素于24h、48h处理原头蚴体细胞后的变化。结果:通过MTT法确定出丝裂霉素的合适浓度范围为40～80μmol/L,并分为6组。体细胞经不同浓度的药物处理24h后,透射电镜下发现在40μmol/L～70μmol/L的各组细胞均有凋亡细胞,细胞核固缩、凝聚,甚至断裂,形成凋亡小体。通过荧光显微镜与TUNEL法检测到50μmol/L和60μmol/L两组的细胞有明显地凋亡形态学改变,以后者细胞发生凋亡的细胞数最多。荧光染色后,计算细胞凋亡率为19.574%,与阴性对照组相比较,p值<0.01。然而,琼脂糖凝胶电泳法未能出现凋亡细胞DNA典型的“梯形带”。48h后,荧光染色计数发现,各组发生凋亡的细胞数有所下降,p值<0.05,仍以60μmol/L的细胞凋亡率最高。结论:提示丝裂霉素可以诱导原头蚴体细胞发生细胞凋亡,其中60μmol/L的药物浓度作用24h后的原头蚴体细胞发生凋亡的效果最佳。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 实验材料
• 1 实验药物与试剂
• 2 主要实验器材
• 实验方法
• 1 细粒棘球蚴原头蚴的收集与处理
• 2 原头蚴体细胞的分离与培养
• 3 丝裂霉素体外诱导原头蚴体细胞凋亡适宜浓度范围的筛选
• 4 原头蚴体细胞的细胞凋亡检测
• 4.1 透射电镜下观察细胞超微结构的改变
• 4.2 琼脂糖凝胶电泳法
• 4.3 荧光显微镜观察
• 4.4 原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡
• 5 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文