论文摘要
目的分离培养人牙髓细胞,探讨其基本的增殖、分化等生物学特性,通过利用电容耦合电刺激牙髓细胞,研究其对体外培养人牙髓细胞增殖的影响,以探索利用微电流环境在牙组织工程中应用的前景。方法从正畸减数拔除的年轻恒前磨牙中分离、培养牙髓细胞,传代三代至八代的细胞用于生物学特性试验研究:1、利用相差显微镜观察系细胞的一般形态. 2、记录细胞的生长曲线. 3、流式细胞术检测其表面分子的表达. 4、诱导矿化,通过免疫组化及逆转录-聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）等鉴定其诱导分化的结果。在生物学研究的基础上,对体外培养的人牙髓细胞施加场强30V/cm ,频率分别为5、25、50、75、100KHz的电容耦合电刺激,30min/d,连续作用4d,观察不同频率电容耦合电刺激对人牙髓细胞体外增殖作用的影响,对照组正常状态培养,从以下方面检测电容耦合电刺激对人牙髓细胞增殖的影响: 1、倒置显微镜下观察细胞的形态改变. 2、MTT法检测细胞活性及增殖情况. 3、流式细胞仪测定细胞期。结果本实验中人牙髓细胞在体外可多次传代培养而保持旺盛的生长状态,其生长曲线在8-10天达到平稳,流式细胞术结果显示,CD44、CD90、CD147均为阳性,这与间充质干细胞的免疫表型相一致。经矿化诱导培养后,免疫组化结果显示牙本质涎蛋白染色阳性,茜素红染色有矿化结节形成以及碱磷酶表达升高,RT-PCR,DSPP表达阳性。经电容耦合电刺激后结果显示:1、不同频率的电刺激作用后细胞形态和对照组无明显差别。2、MTT检测显示经电容耦合电刺激后的人牙髓细胞增殖能力和对照组明显不同,其中50Hz刺激组生长曲线最高,明显快于其他频率刺激组（P<0.01）。3、流式细胞仪检测表明,经电容耦合电刺激作用以后,所有样本均未发现有DNA倍体异常的细胞（diploid:100%）;人牙髓细胞细胞周期发生了改变,S期细胞百分比和刺激频率有关。结论本实验从人年轻恒牙获得的人牙髓细胞易于分离培养,细胞状态较原始,具有干细胞特性,经诱导可分化为成牙本质细胞,提示其具有作为牙组织工程种子细胞的潜能。频率是影响电容耦合电刺激细胞生物学效应的重要因素之一,频率不同,其产生的促细胞增殖效应不一,50kHz可能是促进人牙髓细胞体外增殖的适合频率。
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- [1].血小板浓缩生长因子对人牙髓细胞存活及其增殖分化的影响[J]. 四川大学学报(医学版) 2018(05)
- [2].辛伐他汀对人牙髓细胞和脂多糖诱导的人牙髓细胞血管内皮生长因子的表达影响[J]. 中国医院药学杂志 2014(13)
- [3].卵黄高磷蛋白对人牙髓细胞增殖的影响[J]. 北京口腔医学 2013(01)
- [4].辛伐他汀对人正常牙髓细胞和脂多糖诱导的人牙髓细胞增殖的影响[J]. 中国医院药学杂志 2013(07)
- [5].白介素1β对人牙髓细胞短期矿化影响的研究[J]. 赣南医学院学报 2013(02)
- [6].新型复合盖髓材料对人牙髓细胞分化的体外诱导效果[J]. 口腔材料器械杂志 2013(03)
- [7].应用流式细胞术检测人牙髓细胞内活性氧的方法探讨[J]. 上海口腔医学 2012(06)
- [8].羟基磷灰石对人牙髓细胞内游离钙的影响[J]. 实用口腔医学杂志 2009(03)
- [9].两型腺相关病毒对培养人牙髓细胞转染效率的研究[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版) 2009(03)
- [10].富血小板纤维蛋白凝胶析出液对人牙髓细胞体外矿化的影响[J]. 右江民族医学院学报 2015(03)
- [11].碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响[J]. 现代口腔医学杂志 2011(02)
- [12].人牙髓细胞诱导牙本质再生的实验观察[J]. 临床口腔医学杂志 2009(04)
- [13].周期性张应变对人牙髓细胞L型钙离子通道基因表达的影响[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2009(08)
- [14].碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞迁移的影响[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2010(10)
- [15].神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响[J]. 口腔医学 2016(12)
- [16].碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞生物学活性的影响[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2013(07)
- [17].碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞迁移和碱性磷酸酶活性的影响[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2011(11)
- [18].体外培养的人牙髓细胞表型分析[J]. 临床口腔医学杂志 2009(03)
- [19].周期性张应变对人牙髓细胞形态、存活率和增殖活性的影响[J]. 上海口腔医学 2009(06)
- [20].五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制研究[J]. 中国医药指南 2019(20)
- [21].成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版) 2011(03)
- [22].牙龈卟啉单胞菌对牙髓成纤维细胞胞内感染的研究[J]. 华西口腔医学杂志 2008(01)
- [23].载脂蛋白D在人牙髓细胞增殖及迁移中的作用[J]. 口腔疾病防治 2019(06)
- [24].生物活性玻璃和牙本质浸提蛋白对人牙髓细胞的作用[J]. 北京大学学报(医学版) 2017(02)
- [25].脂多糖上调人牙髓细胞B细胞淋巴瘤-2蛋白及其相关X蛋白的表达[J]. 国际口腔医学杂志 2015(04)
- [26].锁骨颅骨发育不良患者牙髓细胞的生物学特性及超微结构分析[J]. 解放军医药杂志 2014(10)
- [27].热休克蛋白70对大鼠牙髓细胞高温损伤的影响[J]. 口腔医学研究 2012(10)
- [28].三种生物活性材料对牙髓细胞生长影响的体外研究[J]. 现代口腔医学杂志 2014(02)
- [29].碱性成纤维细胞生长因子对牙髓细胞Delta蛋白表达的影响[J]. 山西医药杂志(下半月刊) 2013(01)
- [30].人类牙髓细胞中基质细胞衍生因子-1α/CXCR4轴的调控(英)[J]. 口腔生物医学 2011(01)