沙棘中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

论文摘要

实验选用中国沙棘（Hippophae rham noides L. subsp. chinensis Rousi）枝叶为研究材料,利用酶-抑制剂筛选模型、对沙棘中的活性部位进行AGI筛选,选择高活性的AGI部位,进行体外酶学动力学研究、体内小鼠耐糖量模型和糖尿病小鼠模型实验研究,探索高活性的AGI部位对血糖的影响及其作用机理。现将主要的研究内容和结果详细介绍如下:1.依次用极性不同的溶剂乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水从沙棘粗粉中提取,得到三个不同提取部位;用乙醇回流热水浸法提取,Sevage法除蛋白,得到沙棘粗多糖。乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖提取得率分别为1.52%、1.71%、2.41%和2.79%。2.利用AGI的筛选模型,分别对四个不同提取部位进行AGI活性筛选。结果:乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖抑制活性分别为20.34%、13.43%、71.28%和90.43%。3.选择高活性的沙棘粗多糖提取部位,采用硫酸-苯酚法测得沙棘粗多糖的含糖量为28.52%。并对沙棘粗多糖进行理化性质和体外酶学动力学研究,结果:沙棘粗多糖浓度在0.0098 mg/mL-0.625mg/mL之间时,酶的抑制率随着浓度的增大而升高,IC50为0.01912mg/mL,浓度为0.625mg/mL时抑制率达92.52%,且与酶结合迅速,酸碱范围广,热稳定性好,沙棘粗多糖是一种高活性的竞争可逆性AGI,抑制常数Ki = 5.26mg/mL。4.采用小鼠耐糖量模型,以沙棘粗多糖为实验药物,观察沙棘粗多糖对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、淀粉负荷剂量后的正常小鼠血糖影响,结果:与对照组比较,淀粉组血糖值降低较为明显（P<0.01）,蔗糖组次之（P<0.05）。表明沙棘粗多糖能够提高正常小鼠的耐糖量;通过抑制肠道内的AG而发挥作用,体内降血糖作用与阿卡波糖相似。5.用四氧嘧啶糖尿病小鼠动物模型,观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响,结果:与模型组比较,给药2周和4周后,沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显（P<0.01,P<0.05）,降糖率分别为31.72%和45.70%,沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之（P<0.05,P<0.05）,降糖率分别为28.02%和39.38%。表明沙棘粗多糖对四氧嘧啶致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用,且作用强度与剂量呈相关性。6.用链脲佐菌素糖尿病小鼠动物模型,观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响,结果:与模型组比较,给药2周和4周后,沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显（P<0.01,P<0.01）,降糖率分别为33.14%和43.78%,沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之（P<0.05,P<0.05）,降糖率分别为27.07%和36.43%。表明沙棘粗多糖对链脲佐菌素致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用,且作用强度与剂量呈相关性。

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中文摘要

Abstract

符号说明

序言

文献综述

第一章 α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展

1.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂的来源

1.1.1 国内外从天然产物中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究

1.1.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂化合物的分类

1.1.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用机理

1.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂的药理作用

1.2.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂与糖尿病

1.2.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂与病毒感染

1.2.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂与肿瘤

1.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制剂与心血管疾病

1.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的临床运用

1.3.1 已用于临床的α-葡萄糖苷酶抑制剂的理化特性

1.3.2 三种α-葡萄糖苷酶抑制剂的临床药效学特征比较

1.3.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的临床治疗作用

1.3.4 α-葡萄糖苷酶抑制剂的不良反应

1.3.5 其它

第二章治疗糖尿病药物的研究进展

2.1 胰岛素和胰岛素类似物

2.1.1 胰岛素（Regular insulin RI）

2.1.2 胰岛素类似物

2.2 促胰岛素分泌的药物

2.2.1 磺酰脲（Sulfonylureas SUR）类胰岛素促泌剂

2.2.2 非磺酰脲类胰岛素促泌剂

2.2.3 胰高血糖素样肽-1（Glucagons-like-peptide-1 GLP-1 ）

2.3 胰岛素增敏剂

2.3.1 双胍类降糖药

2.3.2 噻唑烷二酮类药物（TDZ）

2.4 抑制碳水化合物吸收的药物

2.4.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂

2.4.2 淀粉不溶素（Pramlintide）

2.5 糖异生抑制剂

2.6 胰岛素降解抑制剂

2.7 醛糖还原酶（AR）抑制剂

2.8 葡萄糖激酶（GK）激活剂

2.9 α2－肾上腺素受体拮抗剂

2.10 其它

2.11 结语

第三章糖尿病模型的研究进展

3.1 酶-抑制剂模型

3.1.1 4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物的酶-抑制剂筛选模型

3.1.2 以淀粉、蔗糖、麦芽糖为底物的酶-抑制剂筛选模型

3.2 建立糖尿病动物模型的研究

3.2.1 化学物质诱导性模型

3.2.2 自发性或遗传性动物模型

3.2.3 胰腺部分切除模型

3.2.4 转基因糖尿病模型（Transgenic diabetes mode1）

第四章高原药用植物沙棘的研究进展

4.1 高原植物沙棘的生物学特点

4.2 有关沙棘的本草记载

4.3 沙棘植物的现代研究状况

4.3.1 沙棘含有生物活性物质的种类

4.3.2 沙棘在植物资源学方面的研究以及其产品应用开发现状

4.4 沙棘的药理作用研究及临床运用

4.4.1 对心、脑血管系统疾病的作用

4.4.2 对免疫系统的作用和抗肿瘤、抗氧化、抗辐射作用

4.4.3 对消化系统疾病的作用

4.4.4 抗炎及促进组织再生作用

4.4.5 抗衰老作用

4.4.6 对肝脏的保护作用

4.4.7 沙棘对血糖的影响

实验部分

第一章沙棘不同活性部位的提取

1.1 材料和仪器

1.1.1 材料

1.1.2 试剂

1.1.3 仪器

1.2 提取方法

1.2.1 按照溶剂极性不同进行各化学部位的提取

1.2.2 沙棘粗多糖的提取和除蛋白

1.3 结果与分析

第二章沙棘中抑制α-葡萄糖苷酶活性部位的筛选

2.1 材料与仪器

2.1.1 材料

2.1.2 试剂

2.1.3 仪器

2.2 实验方法

2.2.1 试剂的配制

2.2.2 酶抑制活性测定方法的建立

2.2.3 精密度（Precision）实验

2.2.4 重复性实验

2.2.5 α-葡萄糖苷酶标准曲线的制作

2.2.6 样品对酶抑制活性的测定

2.3 结果与分析

2.3.1 精密度实验

2.3.2 重复性实验

2.3.3 α-葡萄糖苷酶标准曲线

2.3.4 样品对酶抑制活性的测定

第三章沙棘粗多糖含量测定和酶学动力学研究

3.1 材料和仪器

3.2 实验方法

3.2.1 相关溶液和试剂的配制

3.2.2 酶活性的测定方法

3.3 沙棘粗多糖定性定量试验

3.3.1 沙棘粗多糖的定性试验

3.3.2 用苯酚-硫酸法测定沙棘粗多糖中总糖含量

3.3.3 结果与分析

3.4 沙棘粗多糖酶学动力学实验

3.4.1 沙棘粗多糖不同浓度对酶的抑制活性

3.4.2 沙棘粗多糖与酶的反应时间对酶的抑制活性

3.4.3 沙棘粗多糖在不同的pH 条件下对酶的抑制活性

3.4.4 沙棘粗多糖在不同水浴温度下对酶的抑制活性

3.4.5 沙棘粗多糖对酶抑制可逆与不可逆类型的测定

3.4.6 沙棘粗多糖对а-葡萄糖苷酶抑制作用类型的测定

3.4.7 结果与分析

第四章沙棘粗多糖对小鼠血糖影响的研究

4.1 动物和试药

4.1.1 实验用动物

4.1.2 实验用药

4.2 实验方法

4.2.1 沙棘粗多糖对小鼠耐糖量影响

4.2.3 沙棘粗多糖对四氧嘧啶造模小鼠血糖影响

4.2.4 沙棘粗多糖对链脲佐菌素造模小鼠血糖影响

4.3 结果与分析

4.3.1 沙棘粗多糖对小鼠耐糖量的影响

4.3.2 沙棘粗多糖对四氧嘧啶造模小鼠血糖影响

4.3.3 沙棘粗多糖对链脲佐菌素造模小鼠血糖影响

结论

参考文献

致谢

作者简历

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