论文摘要
白三叶草是一种优良的豆科牧草,适应性较强,既可作为牧草供牲畜使用,又可作为草坪草绿化环境。白三叶喜温和湿润的气候和肥沃的土壤条件,在高温干旱地区不利于其生长,特别是在降水量较少的地区极易枯死,并且病害发生严重,因此限制了白三叶的使用和推广。许多研究者采用诱变育种技术以提高牧草的抗旱性。众所周知,生物体通过体细胞胚状体途径产生的变异能稳定遗传,并且几乎没有嵌合体出现,在生物体优良品系的选育中具有不可替代的作用。因此,本试验通过芽期耐旱评价技术、体细胞胚发生技术及60Co-γ射线诱变技术,研究了干旱胁迫对白三叶诱变种子发芽率、发芽势、叶绿素及水势等性状的影响；生长素和细胞分裂素对体细胞胚发生的影响及60Co-γ辐照对胚性愈伤组织分化率的影响,为白三叶草抗病、耐旱优良品种的选育提供依据。主要研究结果如下：1.以聚乙二醇（PEG-4000）为渗透介质模拟干旱水分胁迫条件,对6份白三叶品种60Co-γ辐照诱变种子萌发期的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、胚根长、叶绿素、胚根水势和子叶水势指标进行测定,运用标准差系数赋予权重法对胡衣阿品种的各PEG浓度胁迫的各测定指标值进行综合评价,筛选出最佳PEG胁迫浓度,并以筛选出的PEG浓度为依据,利用主成分分析法对6份白三叶品种的各测定指标予以鉴定筛选,然后再以筛选后的指标和最佳PEG胁迫浓度为根据,对各品种的抗旱性进行综合评价。实验结果得知：PEG120g/L为白三叶诱变种子萌发期的最佳干旱胁迫浓度；通过主成分分析得知,白三叶的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数的累积方差贡献率达91.13%-98.35%,因此这四项指标可做为主要抗旱性鉴定指标；采用标准差系数赋予权重法,对白三叶诱变种子萌发期的抗旱性进行综合评价,结果得知,6个品种的最佳辐照剂量存在差异。2.以白三叶子叶和下胚轴为外植体,采用正交设计试验,研究不同因素的不同水平对白三叶愈伤组织诱导及继代的影响。结果表明：胡衣阿品种子叶和下胚轴的最佳诱导和继代培养基为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.2 mg/L+KTO.2 mg/L;瑞文德品种子叶最佳培养基为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.35mg/L+KT0.5mg/L,而下胚轴最佳培养基为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.2mg/L+KT0.35mg/L;铺地品种子叶为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT0.5mg/L、而下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA0.35mg/L+KT0.5mg/L;库拉品种子叶为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA0.35mg/L+KT0.5mg/L;海法品种子叶为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.2mg/L+ KTO.35mg/L、下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L;克尔利卡诺瓦品种子叶为改良SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.2mg/L,而下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA0.35mg/L+KT0.5mg/L。3.为了探讨辐射对白三叶胚性愈伤的诱变效应,为白三叶草育种提供依据,以3个白三叶品种不同生长时期（50d和70d）的愈伤组织为材料,进行了60Co-γ不同辐照剂量的诱变处理,并统计其诱变后的分化率。实验结果得知,随着辐射剂量的增加,同一生长时期不同品种的分化率变化规律不一致,同一品种不同生长时期的诱变愈伤组织的分化率也不一致。线性直线回归分析表明70d愈伤组织诱变效应较好,分别得到各品种的半致死剂量,瑞文德为23.18Gy、海法为19.59Gy、铺地为18.64Gy。4.通过对白三叶胚性愈伤（70d）进行60Co-γ不同辐照剂量的诱变处理,结果表明,瑞文德品种辐照诱变1221块愈伤,有144块愈伤分化,在20、30Gy辐照处理下的相对分化率分别为51.61%和55.33%；海法品种辐照826块愈伤,有157块愈伤分化,15、20Gy辐照的愈伤相对分化率分别为27.43%和49.73%,铺地品种辐照1470块愈伤,共有227块愈伤分化,15、20Gy辐照的愈伤相对分化率分别为58.4%和24.7%。初步获得叶片增大和叶片变厚、茎部增粗2个变异单株。