9-硝基喜树碱叶酸聚合物胶束肿瘤靶向递药系统研究

论文摘要

恶性肿瘤是一种死亡率极高的疾病,严重威胁着人类的健康。目前化学药物疗法在肿瘤的治疗中占有重要的地位,然而大多数化疗药物组织细胞选择性差,毒副作用大,难溶于水,使其临床应用受到了极大的限制。因此,化疗药物肿瘤靶向载药传递系统的研究具有重要的意义。致力于解决化疗药物治疗的局限性,本研究构建了叶酸聚合物胶束给药系统,旨在为难溶性药物肿瘤靶向传递提供一种新的途径。本研究的主要内容包括：叶酸修饰的聚合物胶束载体材料——叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（folate-PEG3500-DSPE）的制备;包载9-硝基喜树碱（9-nitro-camptothecin）的叶酸聚合物胶束的制备及理化表征；叶酸聚合物胶束靶向性研究；含不同比例的叶酸聚合物载体材料制得的9-NC载药胶束体内、体外药效学评价。叶酸聚合物胶束载体材料,通过N,N’-二环己基碳二亚胺（DCC）脱水缩合的酰化反应制得,并经1H-NMR结构确证,RP-HPLC检测,纯度大于95%。9-NC聚合物胶束采用叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（FA-PEG3500-DSPE）和甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE）混合物作胶束载体材料,薄膜-水化法制备,并经处方优化,动态光散射仪进行粒度分析,HPLC测定包封率、载药量。优化后的9-NC聚合物胶束平均粒径约24-27nm,粒度分布很窄,包封率、载药量分别为95.7%和3.24%,且体外释放研究显示该聚合物胶束具有良好的缓释效应。叶酸聚合物胶束体外药效学研究采用肿瘤细胞摄取及细胞毒性试验评估,结果显示,经叶酸修饰的聚合物胶束（摩尔比, 1：100=FA-PEG3500-DSPE/mPEG2000-DSPE）对KB细胞具有更强的亲和力,能介导更多的抗肿瘤药物被摄取进入细胞,相对于游离药物及未经叶酸修饰的聚合物胶束其抗肿瘤活性分别提高了约3.7和2.0倍。采用荧光活体成像技术进行的肿瘤靶向性研究结果显示,叶酸修饰的聚合物胶束在肿瘤组织中的蓄积明显增加。此外,采用人口腔上皮癌细胞皮下异植瘤生长抑制方法进行的体内药效学研究结果显示,叶酸修饰的9-NC聚合物胶束组的体内抗肿瘤活性均有很大程度的提高,且在所有实验组中包括不同FA-PEG3500-DSPE/mPEG2000-DSPE比例（摩尔比,0：100,0.1：100,1：100,10：100）的叶酸聚合物胶束组在内,具有适宜的FA-PEG3500-DSPE/mPEG2000-DSPE摩尔比（1：100）的聚合物胶束组显示出最强的抗肿瘤活性。综上,叶酸聚合物胶束为难溶性药物提供了一种非常有前景的主动肿瘤靶向纳米载体,而且叶酸聚合物的比例对聚合物胶束的体内生物学行为及抗肿瘤活性影响显著,在对于类似有关叶酸介导肿瘤靶向的递药系统研究中应予以充分的考虑。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 综述
• （一） 9-硝基喜树碱及其制剂研究进展
• （二） 基于肿瘤靶向的聚合物胶束研究进展
• 本论文立题依据、研究目的和创新之处
• 第一章 叶酸聚合物胶束载体材料的制备及表征
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 3500-DSPE)的制备'>2.1 FA-PEG-DSPE(folate-PEG₃₅₀₀-DSPE)的制备
• 2粗品合成,分离纯化及纯度检测'>2.1.1 FA-PEG-NH₂粗品合成,分离纯化及纯度检测
• 2.1.2 FA-PEG-SUC粗品合成,分离纯化及纯度检测
• 2.1.3 FA-PEG-DSPE粗品合成,分离纯化及纯度检测
• 2.2 FA-PEG-DSPE结构表征
• 3 实验结果
• 2的制备'>3.1 FA-PEG-NH₂的制备
• 2分离纯化'>3.1.1 FA-PEG-NH₂分离纯化
• 2纯度检测'>3.1.2 FA-PEG-NH₂纯度检测
• 3.2 FA-PEG-SUC的制备
• 3.3 FA-PEG-DSPE的制备
• 3.4 FA-PEG-DSPE结构表征
• 4 讨论与结论
• 第二章 9-NC叶酸聚合物胶束的的制备及表征
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 2.1 9-硝基喜树碱含量测定的RP-HPLC分析方法
• 2.2 聚合物胶束的的制备方法
• 2.3 聚合物胶束的的粒径分析及形态观测
• 2.4 聚合物胶束的的包封率及载药量测定
• 2.5 处方优化
• 2.6 冻干稳定性考察
• 2.7 体外药物释放研究
• 3 实验结果
• 3.1 9-NC含量测定RP-HPLC分析方法建立（外标法）
• 3.1.1 方法专属性
• 3.1.2 标准曲线
• 3.1.3 精密度考察
• 3.1.4 最低检测限和定量限
• 3.2 单因素考察
• 3.2.1 旋转蒸发温度的选择
• 3.2.2 水化介质pH值及用量
• 3.2.3 投药比
• 3.3 胶束制备处方优化
• 3.4 冻干工艺稳定性考察
• 3.5 9-硝基喜树碱聚合物胶束的理化表征
• 3.5.1 粒径及形态
• 3.5.2 体外药物释放
• 4 讨论与结论
• 第三章 叶酸聚合物胶束肿瘤细胞摄取及毒性研究
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 叶酸聚合物胶束的肿瘤细胞摄取
• 2.3 叶酸聚合物胶束的体外细胞毒性
• 3 实验结果
• 3.1 叶酸聚合物胶束对肿瘤细胞的亲和性
• 3.2 叶酸聚合物胶束的体外细胞毒性
• 4 讨论与结论
• 第四章 9-NC叶酸聚合物胶束体内药效学研究
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 2.1 荷瘤裸鼠模型建立
• 2.2 叶酸聚合物胶束肿瘤靶向性研究
• 2.3 叶酸聚合物胶束体内抗肿瘤活性研究
• 3 实验结果
• 3.1 叶酸聚合物胶束肿瘤靶向能力
• 3.2 叶酸聚合物胶束的体内抗肿瘤活性
• 4 讨论与结论
• 论文工作小结
• 参考文献
• 缩略词表
• 发表论文
• 致谢