酿酒葡萄籽中原花青素的提取和抗氧化性研究

论文摘要

原花青素是葡萄籽多酚的主要活性物质,现代研究表明,原花青素不仅具有高效的抗氧化活性,而且还有保护心血管、抗癌抗辐射、皮肤保健及美白等功效。本文对葡萄籽中原花青素的提取工艺、分离纯化及抗氧化活性进行以下几个方面的研究：以儿茶素为标准品,采用浓硫酸-香草醛法测定原花青素含量；以原花青素的提取量为指标,通过单因素实验确立影响原花青素提取量的相关因素,并通过正交实验确定提取的最佳条件。对原花青素进行超声波助提实验,筛选到提取的最佳工艺条件为：超声功率80W、料液比1：35、超声时间30min、乙醇浓度50%,原花青素含量为55.728mg/g；对原花青素进行微波助提实验,筛选到提取的最佳工艺条件为：料液比1：25、微波功率115W、微波时间40s、乙醇浓度80%,原花青素含量为106.936mg/g；对原花青素进行酶解助提实验,筛选到提取的最佳工艺条件为：酶解温度45。℃、pH4.0、酶解时间1.0h、酶液浓度100u/mg,原花青素含量为87.513mg/g。通过静态吸附、解吸试验,从5种不同极性的大孔树脂中筛选得到,AB-8树脂的吸附、解吸效果最好,吸附率和解吸率分别达到78.00%、92.42%。选用AB-8树脂对动态吸附条件进行优化实验,确定浓度为3mg/mL的原花青素以3BV/h的流速流经树脂柱时,AB-8的吸附率最高可达到78.19%；对解吸条件进行优化实验,用100mL浓度为30%的乙醇溶液以2BV/h的流速对吸附饱和后的树脂进行洗脱,原花青素的解吸率高达92.37%。将10%-50%乙醇洗脱液进行冻干处理,对原花青素冻干粉的纯度进行测定,得到该混合物的纯度为85.16%。采用四种不同处理样品：原花青素粗提液（GSP0）、25%乙醇洗脱液（GSP1）、50%乙醇洗脱液（GSP2）、50%乙醇洗脱液冻干粉（GSP3）,分别进行抗氧化活性实验的研究。1.在清除HO·的实验中,以浓度相同的Vc溶液为对照,检测四种样品的抗氧化性,结果表明：不同样品清除率的大小依次是GSP3、Vc、GSP2、GSP1、GSPO,当浓度大于2.3mg/mL时,Vc溶液的清除率大于GSP3。2.在清除O2·-的实验中,原花青素对02·-的清除率与浓度呈正相关,不同样品清除率的大小依次是：GSP3、GSP2、GSP1、GSP0、Vc。3.在测定还原力的实验中,由700nm下测得吸光值曲线可以看出,还原力与原花青素的浓度呈正比,且它们之间还原力大小关系是：GSP0>GSP1>GSP3>GSP2>Vc.4.在抗油脂氧化能力的实验中,与未添加抗氧化剂的样品相比,原花青素有一定的抗油脂氧化能力,动物油、植物油的过氧化值分别为64.22meq/kg（动物油对照为144.83meq/kg）、433.31meq/kg（植物油对照为573.72meq/kg）,且与植物油相比,原花青素对动物油的保护作用更明显。5.利用电子顺磁共振技术测定原花青素提取液对DPPH清除率,不同样品对DPPH清除能率的大小依次是：GSP3、GSP0、GSP2、GSP1,样品中原花青素浓度与清除率呈正相关,与低浓度原花青素溶液相比,高浓度溶液对DPPH的清除具有高效性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 酿酒葡萄概述
• 2 葡萄籽原花青素
• 2.1 原花青素的结构与理化性质
• 2.2 原花青素的生物活性
• 3 原花青素的提取、分离与检测
• 3.1 原花青素的提取
• 3.2 原花青素的分离
• 3.3 原花青素的检测
• 4 原花青素的抗氧化性
• 4.1 自由基的产生及危害
• 4.2 抗氧化剂的作用机理
• 4.3 抗氧化的检测方法
• 5 研究内容和意义
• 第二章 葡萄籽原花青素的提取工艺
• 1 实验材料
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 原花青素的测定
• 2.1.1 标准曲线的绘制
• 2.1.2 样品的测定
• 2.2 原花青素的提取
• 2.2.1 超声波助提原花青素的单因素实验
• 2.2.2 微波助提原花青素的单因素实验
• 2.2.3 酶法助提原花青素的单因素实验
• 2.3 最优提取工艺的验证
• 3 结果与讨论
• 3.1 超声波助提原花青素的单因素影响研究
• 3.2 微波助提原花青素的单因素影响研究
• 3.3 酶法助提原花青素的单因素影响研究
• 4 本章小结
• 第三章 葡萄籽中原花青素的纯化工艺
• 1 实验材料
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 原料前处理
• 2.1.1 样品液的制备
• 2.1.2 树脂预处理
• 2.1.3 树脂装柱
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 树脂静态吸附、解吸试验
• 2.2.2 树脂吸附条件的优化
• 2.2.3 AB-8树脂恒定洗脱条件的优化
• 2.3 纯化后原花青素的纯度测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 不同树脂的静态吸附率、解吸率与时间的关系
• 3.2 树脂吸附条件的优化
• 3.3 AB-8树脂恒定洗脱条件的优化
• 3.4 纯化后原花青素的纯度测定
• 4 本章小结
• 第四章 原花青素的抗氧化研究
• 1 实验材料
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 清除羟自由基活性
• 2.2 清除超氧阴离子自由基活性
• 2.3 原花青素的还原力测定
• 2.4 原花青素的抗油脂氧化能力测定
• 2.5 利用电子顺磁共振技术测定清除DPPH·自由基活性
• 3 结果与讨论
• 3.1 清除羟自由基活性
• 3.2 清除超氧阴离子自由基活性
• 3.3 原花青素的还原力测定
• 3.4 原花青素的抗油脂氧化能力测定
• 3.5 利用电子顺磁共振技术测定清除DPPH·自由基活性
• 4 本章小结
• 主要结果与展望
• 参考文献
• 致谢