论文摘要
为寻找高效低毒的天然抗氧化剂的良好来源,本研究以药用植物青檀内生真菌为实验材料,采用抗氧化能力试剂盒对其菌种的发酵产物进行了筛选,选取其中抗氧化活性最高的菌株作为本研究的供试菌株并进行了形态学鉴定。我们测试了供试菌株发酵产物的还原力、抗氧化活性稳定性、及其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力。此外还对其发酵产物中活性成分的分离、纯化、鉴定进行了初步研究。结果如下：1、采用总抗氧化试剂盒（T-AOC）对实验室保存的青檀内生真菌进行抗氧化活性菌株筛选,结果发现青檀内生真菌的活性次生代谢产物主要分布在发酵液中,其中分离自山东泰安的青檀Pterocektis. tatarinowii叶片中的菌株No.81表现出明显较高的抗氧化活性,总抗氧化能力为16.12U/mL,被选作为本研究的供试菌株,经形态学鉴定为球毛壳菌。2、对筛选所的青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物进行初步纯化,采用还原力、抗氧化活性稳定性、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基、羟基自由基清除能力清除作为指标具体检测青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物的抗氧化活性,以芦丁作为阳性对照。结果显示,青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物具有较好的还原力,还原力与浓度之间存在明显的正相关的量效关系；青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物的抗氧化活性稳定性良好,在实验结束时,各浓度处理组的POV值均低于阳性对照芦丁的POV,抑制抗氧化的效果明显优于芦丁。青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物对DPPH自由基和超氧阴离子自由基具有较强的清除能力,结果显示青檀内生球毛壳菌株No.81发酵产物对DPPH自由基的IC50值为0.023mg/mL,而芦丁IC50为0.042mg/mL,在0-5 mg/mL处理浓度范围内,青檀内生球毛壳C. globosum菌株No.81发酵液提取物在低浓度时（0.02和0.04 mg/mL）要高于芦丁,在高浓度时则和芦丁对照品相当；青檀内生球毛壳Chaetomium. globosum菌株No.81发酵液提取物对超氧阴离子自由基（O2-·）的IC50值为0.478mg/mL,阳性对照芦丁的IC50值为0.447mg/mL,两者在超氧阴离子清除能力上相差不大。青檀内生球毛壳C. globosum菌株No.81发酵液提取物对羟基自由基（OH·）有一定的清除作用,且清除率随着浓度的增加而增大,但是对羟基自由基的清除能力要低于阳性对照物芦丁。3、颜色反应结果显示,青檀内生球毛壳C. globosum菌株No.81发酵液提取物中主要活性成分为多酚类物质,采用薄层层析和硅胶柱层析的方法对样品中的多酚类物质进行分离纯化。多酚类物质衍生后经GC-MS检测,结果得到四种物质,分别是1,2-Benzenedicarboxylic acid, butyl 2-methylpropyl ester（1,2-苯二甲酸丁基-2甲基酯）; Tributyl acetylcitrate（乙酰柠檬酸三丁酯）；9-Octadecenamide（油酸酰胺）；1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono（2-ethylhexyl） ester（邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯）。