MiR-181a通过靶向PRKCD调节宫颈癌放疗敏感性

论文摘要

目的：研究不同放疗敏感性的宫颈癌组织中的miRNA表达的区别,筛选出放疗敏感相关的miRNA,并且研究miRNA调节放疗敏感性的机制材料和方法：假设miRNA能调节宫颈癌放疗敏感性,使用miRNA芯片筛选出不同放疗敏感性的宫颈癌的miRNA的表达。Real—time PCR验证miRNA芯片筛选的结果。根据差异表达的倍数和P值,挑选出miR一181a作为课题主要研究的miRNA.选择放疗不敏感的宫颈癌细胞SiHa,放疗敏感的宫颈癌细胞Me180作为课题研究的细胞。miR—181a—mimic和miR—181a—inhibitor转染宫颈癌细胞后,克隆形成实验检测放疗敏感性。用慢病毒载体构建稳定转染miR—181a的稳转株,体外体内实验验证稳定转染株的放疗敏感性。增殖实验,周期实验,凋亡实验检测miR—181a调节放疗敏感性的可能机制。mRNA芯片和生物信息软件预测miR-181a可能的靶基因。双荧光素酶实验验证靶基因。Real—time PCR, western blotting,克隆形成实验验证靶基因的表达和功能。结果：我们采用miRNA芯片技术筛选11例放疗敏感和7例放疗抵抗的宫颈癌标本中的miRNA表达谱,筛选出与放疗敏感相关的miRNA.结果我们筛选出8个与放疗敏感相关的miRNA.挑选miRNA—181a作为我们研究的对象。过表达miR-181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性,低表达miR一181a能促进宫颈癌细胞的放疗敏感性。我们建立表达miR—181a的稳定转染株种植于裸鼠,体内实验验证miR一181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性。通过mRNA芯片技术和生物信息软件我们预测miR一181a的作用靶基因,PRKCD成为可能的靶基因。过表达miR—181a能抑制宫颈癌细胞的PRKCD的表达,而低表达miR—181a能增加宫颈癌细胞的PRKCD的表达。抑制宫颈癌细胞PRKCD的表达能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性,并且促进宫颈癌细胞的PRKCD的表达能增加宫颈癌细胞的放疗敏感性。恢复高表达miR—181a的宫颈癌细胞株中的PRKCD的表达能逆转miR—181a对宫颈癌细胞株对放疗抵抗作用。结论：我们认为miR—181a能通过抑制靶基因PRKCD的表达来抑制宫颈癌的放疗敏感性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 miR-181a在不同放疗敏感性的宫颈癌标本及细胞株的表达
• 第一章 引言
• 第二章 材料和方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 第二部分 miR-181a抑制宫颈癌放疗敏感性
• 第一章 引言
• 第二章 材料和方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 第三部分 miR-181a靶基因的筛选及功能分析
• 第一章 引言
• 第二章 材料和方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 全文总结
• 展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢