论文摘要
猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病。该病可致各年龄猪只发生急性和慢性感染，发病率和死亡率常在20％以上，最急性型死亡率可高达80％～100％，慢性猪传染性膜肺炎潜伏于猪群内，可使猪只生长缓慢，平均日增重下降，饲养报酬降低。自1957年Pattison首次报道本病以来，该病在世界范围内广泛流行，给各国养猪业带来了严重的经济损失。由于APP对多种抗生素都易产生耐药性，所以疫苗接种是防制本病的主要措施。目前，国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病，但由于APP血清型较多，灭活疫苗对不同血清型APP的交叉保护效果十分有限，因此新型疫苗的开发已经成为研究热点。研究表明，通过分子生物学手段构建的一些PCP弱毒疫苗和新兴起的一种ghost疫苗较灭活疫苗的免疫保护效果有明显提高，但这两种疫苗也存在一定问题，弱毒疫苗随着毒力降低，其免疫原性也有所降低，且存在毒力返强的可能性；ghosts疫苗则存在菌体裂解不彻底等缺点。以APP主要毒力因子为组份的亚单位疫苗则不存在上述缺点，也可提供较高的保护水平，但是由于亚单位疫苗中不含有全菌体成分，所以疫苗的抑菌作用十分有限，感染的猪只虽不表现症状，但可隐性感染而成为病原携带者。鉴于此，本试验将通过基因工程方法重组表达的APP六种毒力因子分别添加到APP7灭活苗中，希望添加的重组蛋白成分能够提高灭活苗的交叉保护力，从而筛选出具有较好保护效果的重组亚单位菌苗组合，为今后APP新型疫苗的研究提供依据。本研究将已经重组表达的APP六种主要毒力因子蛋白（rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rOMP、rApxⅣ和rApfA）与APP7灭活苗进行如下组合：试验Ⅰ组（灭活苗）、试验Ⅱ组（灭活苗+rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP）、试验Ⅲ组（灭活苗+rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApxⅣ）、试验Ⅳ组（灭活苗+rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfA）和对照组（PBS），进行小鼠的免疫攻毒保护试验。免疫共分3次，每次间隔2周。第3次免疫后第7天，分别以APP1型菌（5×109cfu）和APP7型菌(1011cfu)进行攻毒。通过检测血清特异性抗体和脾脏T淋巴细胞增殖能力的动态变化，结合攻毒后小鼠的保护率、肺脏病理变化及间接免疫荧光抗原定位，综合评价重组亚单位菌苗的免疫保护效果。结果显示试验Ⅰ组的OMP抗体、试验Ⅱ组的ApxⅠ和OMP抗体、试验Ⅲ组的ApxⅠ抗体、试验Ⅳ组的菌毛抗体均处于较高的水平，攻毒前与其它各组均有显著差异（p＜0.05）；试验Ⅱ组的细胞免疫水平在攻毒前与试验Ⅰ、Ⅳ两组及对照组有了极显著差异（p＜0.01），与试验Ⅲ组有显著差异（p＜0.05）；小鼠攻毒后保护率、肺脏病变及肺脏抗原定位的结果与体液和细胞免疫检测结果基本一致，试验Ⅱ组最优，试验Ⅲ、Ⅳ两组次之，试验Ⅰ组在试验组中最差，仅好于对照组。结果表明，灭活苗中添加重组蛋白成分可以提高灭活苗的交叉保护力，尤其是试验Ⅱ组的ApxⅠ和OMP抗体显著高于其它各组（p＜0.05），细胞免疫也处于最高水平，同时对于APP1和APP7两个血清型攻毒的保护率、肺脏病变及对肺脏内APP菌的清除作用都明显优于其它各组。揭示疫苗Ⅱ组可通过激活机体的体液免疫和细胞免疫反应，对不同血清型APP的攻击提供很好的交叉保护作用，为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。
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标签：胸膜肺炎放线杆菌论文; 重组亚单位菌苗论文; 保护效力论文; 免疫机制论文;