rhG-CSF联合VEGF治疗快速老化模型小鼠P10的实验研究

论文摘要

研究目的：本研究主要探讨粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF）联合血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）对快速老化模型小鼠P10（senescence accelerated mouse P10 SAM-P10）认知障碍的改善、神经干细胞再生以及抗凋亡方面的作用。研究方法：选用90只SAM-P10为实验动物，随机分为对照组、rhG-CSF治疗组（单治组）、rhG-CSF与VEGF联合治疗组（联合组），每组30只。对照组给予生理盐水，单治组皮下注射rhG-CSF（100μg/kg），1次/d，连续7d。联合组首先腹腔注射VEGF（50μg/kg），1次/d，连续3d，随后皮下注射rhG-CSF（50μg/kg），1次/d，连续7d。然后各组小鼠均给予腹腔注射5溴-2脱氧尿苷（5-bromodeoxyuridine Brdu，50μg/kg），1次/d，连续七d。并于给药前及给药后第7、14、28、56d进行Morris水迷宫测试，记录其逃避潜伏期和目的象限游泳距离百分比。每次测试后处死小鼠，灌注取脑，制作石蜡切片，并用免疫组织化学方法检测三脑室周围nestin、Brdu以及海马区caspase-3的表达。采集图象，计数免疫阳性细胞数，数据用SPSS11.5 for Windows软件包进行统计学处理。数据以（?）±s表示，采用方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。结果1 Morris水迷宫测试结果1．1定位航行实验结果对照组于第14、28、56d，逃避潜伏期明显延长（P＜0.05）；单治组于不同时间点与给药前相比，差异无统计学意义（P＞0.05），第14天逃避潜伏期较对照组缩短（P＜0.05）；联合组于第56d逃避潜伏期较给药前缩短，于第14、28、56d逃避潜伏期较对照组缩短（P＜0.05），第56天逃避潜伏期较单治组缩短（P＜0.05）1．2空间探索实验结果对照组小鼠目的象限游泳距离百分比于给药后第28、56d较给药前减少（P＜0.05）；单治组目的象限百分比于各个时间点之间差异无统计学意义（P＞0.05），在第14d较对照组增加（P＜0.05）。联合组目的象限百分比在第28、56d较给药前增加（P＜0.05），第14、28、56d较对照组增加（P＜0.05），第56d较单治组增加（P＜0.05）。2免疫组织化学法检测第三脑室周围nestin表达对照组于各时间点均可见第三脑室周围少量nestin免疫阳性细胞表达；单治组于不同时间点均可见nestin免疫阳性细胞表达，但与给药前相比，差异无统计学意义（P＞0.05），第7、14天较对照组多（P＜0.05）；联合组于第56天nestin免疫阳性细胞数较给药前增加，于第7、14、28天较对照组增多（P＜0.05），于第56天较单治组增加（P＜0.05）。3免疫组织化学法检测三脑室周围Brdu表达对照组于第7、14天可见三脑室周围少量Brdu免疫阳性细胞表达；单治组于第7、14天可见三脑室周围Brdu免疫阳性细胞表达，但与给药前相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；联合组于第7、14、28天Brdu免疫阳性细胞数较给药前增加，于第7、14天较对照组增多（P＜0.05），且于第7天较单治组增加（P＜0.05）4免疫组织化学法检测海马caspase-3表达对照组于各时间点均可见海马区caspase-3免疫阳性细胞表达，且于第28、56天较给药前明显增多（P＜0.05）；单治组于不同时间点均可见海马区caspase-3免疫阳性细胞表达，但与给药前相比，差异无统计学意义（P＞0.05），第7、14天较对照组减少（P＜0.05）；联合组于第56天caspase-3免疫阳性细胞数较给药前减少，于第7、14天较对照组减少（P＜0.05），于第56天较单治组减少（P＜0.05）。结论：1．rhG-CSF对SAM-P10的认知障碍有改善作用，但只能在一定程度上延缓其学习记忆功能的衰退。rhG-CSF与VEGF联合应用能显著改善SAM-P10的认知障碍，与单独应用rhG-CSF相比，其能更明显地改善SAM-P10的认知障碍，且作用更持久。2．rhG-CSF能在一定程度上增加三脑室周围胶质细胞nestin免疫阳性细胞表达，rhG-CSF与VEGF联合应用能明显增加三脑室周围胶质细胞nestin表达，促进损伤神经元地代偿性修复，参与神经连接地建立。3．rhG-CSF在早期阶段可以增加三脑室周围Brdu免疫阳性细胞表达，rhG-CSF与VEGF联合应用较单独应用rhG-CSF作用更明显，能促进内源性神经干细胞地原位增殖。4．rhG-CSF可以在一定程度上减少海马CA1、CA3区caspase-3表达，而rhG-CSF与VEGF联合应用，能明显减少海马CA1、CA3区caspase-3的表达，减少海马神经元的凋亡。

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