论文摘要
前言喉鳞状细胞癌简称喉癌（laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）是我国北方地区高发的头颈部恶性肿瘤。对细胞生长周期进行精确调控，维持细胞正常生长发育平衡是阻止喉癌发生、发展的有效途径，也是成功治疗喉癌的关键。细胞周期蛋白是真核细胞周期循环中主要的调节因子，在人类肿瘤细胞中，已经发现多种细胞周期蛋白的异常表达。CyclinG是细胞周期蛋白家族中发现较晚的新成员，cyclinG1和cyclinG2在结构上具有高度同源性，但在功能上似乎各自发挥着特有的生物学功能。本实验应用免疫组化（S-P）方法对52例原发性喉鳞状细胞癌及其相邻正常黏膜组织新鲜标本中cyclinG1、G2蛋白表达进行检测，分析其与喉癌的组织病理分级、临床分期以及解剖分型的关系，以探讨cyclinG1、G2蛋白表达与喉癌的可能相关性。材料与方法1、标本52例喉癌标本均来自中国医科大学附属第一医院，经病理切片确诊。其相邻正常黏膜组织（手术切缘癌旁1.0cm外黏膜组织）作为对照组。所有患者术前均未行放疗和化疗，均无远隔器官转移。2、免疫组化染色免疫组化（S-P）法，以细胞核和／或胞浆呈棕黄色染色为阳性，随机选取5个非重叠高倍视野，计算染色细胞百分比，阳性为染色细胞数≥5％，阴性为染色细胞数＜5％。3、统计学分析所得数据应用Pearsonχ2检验进行统计学分析。结果免疫组化染色结果：CyclinG1蛋白表达阳性部位位于细胞核，而cyclinG2位于细胞浆中。喉癌及其相邻正常黏膜组织中cyclinG1蛋白表达阳性百分比分别为82.69％（43／52）和30.77％（16／52）；cyclinG2分别为21.15％（11／52）和61.54％（32／52）。统计学处理结果提示cyclinG1蛋白在喉癌中表达增高，而cyclinG2蛋白表达降低。CyclinG1、cyclinG2蛋白在喉癌及其相邻正常黏膜组织中表达差异均具有统计学意义（p＜0.01）。CyclinG1蛋白在高分化、中分化、低分化喉癌中表达阳性百分比分别为47.62％（10／21）、72.22％（13／18）和92.31％（12／13）；cyclinG2蛋白表达阳性百分比分别为42.86％（9／21）、22.22％（4／18）和7.69％（1／13）。CyclinG1蛋白在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期喉癌中表达阳性百分比分别为65.00％（13／20）和93.75％（30／32）；cyclinG2蛋白表达阳性百分比分别为40.00％（8／20）和9.38％（3／32）。CyclinG1蛋白表达增高和cyclinG2蛋白表达降低与喉癌的病理分级，临床分期有关，组织分化程度越低，临床分期越高，cyclinG1蛋白表达增高越明显，而cyclinG2蛋白表达降低越明显。差异均具有统计学意义（p＜0.05）。CyclinG1蛋白在声门型、声门上型喉癌中表达阳性百分比分别为82.14％（23／28）、83.33％（20／24）；cyclinG2蛋白在声门型、声门上型喉癌中表达阳性百分比分别为21.43％（6／28）、20.83％（5／24）。经统计学分析cyclinG1、G2蛋白表达与喉癌的解剖分型无相关性（p＞0.05）。讨论CyclinG1基因由Yamura等于1993年发现，定位于5q32-34，第一个内含子中有p53蛋白结合位点。Cyclin G1蛋白主要定位于细胞核，在骨胳肌中表达水平最高，其次在卵巢、肾脏和结肠组织中也有较高水平的表达。但cyclinG1并非为细胞增殖负性调节因子。在部分骨肉瘤中cyclin G1呈高表达，cyclin G1反义RNA表达减缓骨肉瘤细胞增殖，有促进细胞增长作用。此外，Smith等将cyclin G1 cDNA导入人大肠癌细胞和正常人成纤维细胞，发现cyclin G1表达促进细胞增殖。本实验结果显示cyclinG1蛋白在喉癌组织中表达较其相邻正常黏膜组织中表达增高，差异具有统计学意义。研究发现cyclinG1的持续性高水平表达，对p53的转录活性反应迟钝。过多的cyclinG1通过与PP2A结合使MDM2去磷酸化，促进MDM2介导的p53泛素化，加速p53的降解，从而表现为对p53的负反馈作用，抑制细胞的凋亡，导致肿瘤细胞无限制增长。CyclinG1蛋白的改变可能与喉癌的发生、发展密切相关。应用顺铂、阿霉素等药物处理细胞后发现G2／M期阻滞的细胞比例与cyclinG1的表达明显正相关，推测cyclinG1可能与细胞周期G2／M检查点调控有关。Horne等首先报道了cyclin G2基因克隆，其蛋白主要定位在细胞质中。Bates等的研究表明cyclin G1和cyclin G2的mRNA表达都能被DNA损伤药物放线菌素D诱导，不同的是对cyclin G2的诱导表达呈p53非依赖性。当B细胞的增殖受抑制或发生细胞周期阻抑时，cyclin G2转录水平上调。Wykoff等将抑癌基因VHL重新导入已存在该基因缺陷的肾癌细胞，发现转基因诱导表达的一系列靶基因中包括cyclin G2。Kim Y等在人口腔癌中检测到cyclin G2基因表达的减低。刘洁等应用腺病毒载体转染胃腺癌细胞系SGC-7901，cyclin G2基因有抑制其增殖的作用。本研究中cyclin G2蛋白在喉癌组织中表达较其相邻正常黏膜组织中表达降低，与上述研究结果一致，均表明cyclin G2可能是细胞周期的负性调控因子。喉癌中cyclin G2蛋白表达降低提示其可能与喉癌的发生、发展机制相关。结论1、喉癌中cyclin G1蛋白表达增高，cyclin G2蛋白表达降低提示其可能与喉癌的发生、发展机制相关。2、喉癌中cyclin G1蛋白表达增高与喉癌的组织病理分级，临床分期呈正相关，cyclin G2蛋白表达降低与喉癌的组织病理分级，临床分期呈负相关。CyclinG1、G2蛋白的检测可望成为判断喉癌预后的指标之一。CyclinG1、cyclinG2蛋白表达与喉癌的解剖分型无相关性。