苦瓜蛋白抗动脉粥样硬化作用与其抑制炎性因子生成有关

论文摘要

目的：探讨苦瓜蛋白对apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响，并从炎性因子生成的角度探讨其作用的分子机制。方法：40只6周龄雄性apoE-/-小鼠，体重（18.1±1.4） g，随机分为四组，每组各10只：①普食组（正常饲料喂养，PBS0.1ml/2d，腹腔注射）、②高脂高胆固醇组（高脂高胆固醇饲料喂养，PBS0.1ml/2d，腹腔注射）、③高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组（高脂高胆固醇饲料喂养，苦瓜蛋白0.1ml/2d，腹腔注射）、④普食+苦瓜蛋白组（正常饲料喂养，苦瓜蛋白0.1ml/2d，腹腔注射），其中的高脂饲料为正常饲料加2%胆固醇和10%猪油。12周后，所有小鼠经20%乌拉坦0.2～0.3ml腹腔麻醉，摘除眼球取血。石蜡切片HE染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变。RT-PCR和Western Blot分别血管组织TNF-α、IL-β、NF-kBmRNA和蛋白表达。ELISA测定血浆中炎性因子IL-1β、TNF-α、 IL-6、INF-γ及抗炎因子IL-10水平，免疫组织化学检测主动脉壁IkB表达。结果：高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组与高脂高胆固醇组比较，主动脉窦斑块斑块面积显著减少（p<0.01，n=5），普食+苦瓜蛋白组主动脉窦斑块斑块面积显著低于普食组（p<0.05,n=5）。ELISA法测定血浆中炎性因子和抗炎因子水结果表明，ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后，其血液中炎性因子IL-1β、TNF-α、 IL-6、INF-γ水平均显著高于普通饲料对照组（P<0.01，n=3），但同时IL-10水平仍保持在较高的水平，其显著高于普通饲料对照组（P<0.01，n=3），但IL-10浓度的升高跟不上炎性因子浓度的升高，其体内炎性因子与抗炎因子的已经严重失衡（炎性因子总和≈94pg/mL，抗炎因子=34pg/mL），高脂高胆固醇饲料喂养小鼠经苦瓜蛋白治疗后，血清中的炎性因子上升的趋势回落，抗炎因子与炎性因子之间趋于平衡（炎性因子总和≈41pg/mL，抗炎因子=32pg/mL），但苦瓜蛋白并不能上调抗炎因子IL-10的水平。RT-PCR以及Western检测结果表明，苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁的TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达，其对NF-kB mRNA表达并无影响，但可以影响其蛋白的核转位。进一步研究发现，ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后，其主动脉组织IkB与普食组比较显著降低（0.19±0.05vs0.74±0.15，P<0.05，n=3），但其经苦瓜蛋白干预后，这种降解作用得到显著的抑制（0.19±0.05vs0.36±0.07，P<0.01，n=3）。结论：苦瓜蛋白能够减轻载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变；苦瓜蛋白能抑制炎性因子生成；苦瓜蛋白的抗炎作用与抑制NF-kB蛋白的核转位和抑制IkB蛋白的降解有关。

论文目录

• 主要缩略语英文索引
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 硕士期间发表、待发表论文
• 致谢