论文摘要
HMGB1是一种重要的损伤相关型细胞因子,广泛存在于真核细胞的细胞核内,与DNA相结合,在胞内具有稳定核小体,促进DNA弯曲便于基因转录的功能。而如果HMGB1释放出胞外则可发挥多种生物学功能。主要是参与炎症的反应,可参与多种炎性疾病的发生发展。近期有研究发现心梗患者外周血HMGB1明显增高,HMGB1与心梗后心脏重构密切相关。心脏重构主要是指心肌细胞肥大、非心肌细胞增生以及细胞外基质的沉积导致的心脏大小、形状、功能的改变。其中心肌间质的重构(心肌成纤维细胞增殖和胶原纤维增生)起到了重要作用。目的:通过体外培养SD大鼠CFs,观察HMGB1对CFs增殖、PCNA蛋白表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白分泌的影响,探讨HMGB1与心脏重构的关系。方法:培养的新生SD大鼠CFs分为四组,分别给予浓度0(对照组)、0.01、0.1、和1 mg/L的HMGB1干预,作用时间为6、12、18、24和48小时。1.采用四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖水平2.利用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测PCNA蛋白水平的变化。3.采用荧光实时定量PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达结果:1.与对照组相比,48小时后,HMGB1组新生SD大鼠CFs增殖水平及PCNA蛋白表达均明显增高(p<0.05) ;2. HMGB1对新生SD大鼠CFs的促增殖及升高PCNA蛋白表达的作用在较低浓度水平时呈浓度依赖性,在浓度为0.1mg/L时新生SD大鼠CFs增殖水平及PCNA蛋白表达最高,超过该浓度后,其作用下降(p<0.05); 3.与对照组相比,48小时后,不同浓度的HMGB1组新生SD大鼠CFsⅠ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达水平均有所增高(p<0.05 ; 4.Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达水平呈现对HMGB1在较低浓度水平呈依赖性增高.HMGB1浓度为0.1mg/L时CFs增殖水平和I、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达水平最高。超过该浓度后,HMBG1的作用下降(p<0.05)。未发现HMGB1的上述作用具有时间依赖性。结论:HMGB1能促进新生SD大鼠CFs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达以及成纤维细胞PCNA表达水平的升高,其作用在低水平时呈浓度依赖性,并且浓度为0.1mg/L时效应最明显,超过0.1mg/L浓度后,HMGB1对细胞增殖的促进程度降低。本实验结果证明了HMGB1在一定的浓度范围之内对心肌成纤维细胞存在着促增殖作用。但HMGB1是否在体内发挥着同样的作用有待进一步研究。
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