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农药毒死蜱和氯氰菊酯的遗传毒性研究

2020-11-22阅读(938)

农药毒死蜱和氯氰菊酯的遗传毒性研究

论文摘要

毒死蜱（CAS编号:2921-88-2）是一种有机磷杀虫剂,其化学名称为:O,O-二乙基-O-（3,5,6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸酯,具杀虫活性是因为毒死蜱脱硫形成的毒死蜱氧磷使乙酰胆碱酯酶（AChE）磷酸化。磷酸化的AChE不能水解神经递质乙酰胆碱。过量的乙酰胆碱过度刺激乙酰胆碱受体,导致靶生物死亡。氯氰菊酯（CAS编号:52315-07-8）是一种拟除虫菊酯杀虫剂,其化学名称为:（RS）-a-氰基-3-苯氧苄基（1RS）-顺,反-3-（2,2-二氯乙烯基）-2,2-二甲基环丙烷羧酸酯,具杀虫活性是因为它使嵌于神经膜上的Na+-通道持久开放,严重延迟Na+-通道的激活、失活和去激活,引起神经细胞持续冲动,导致靶生物死亡。毒死蜱和氯氰菊酯是两种广泛使用的农药,但有关其遗传毒性的机制不很明确,本文围绕这一中心问题开展研究。 毒死蜱和氯氰菊酯均具有强疏水性。两种杀虫剂可能通过分配进入血脂和与血蛋白质结合而被运输。杀虫剂的运输直接影响其分布、代谢和排泄。白蛋白和血红蛋白是血液中两种重要的运输蛋白。杀虫剂与蛋白质结合将影响蛋白质的生理功能。为研究杀虫剂与血液蛋白质结合的特征,在1μmol/L牛血清白蛋白或牛血红蛋白溶液中,逐步注入微量的杀虫剂溶液,使杀虫剂与白蛋白或血红蛋白的摩尔比分别从0增至20或100。每次滴定后测量体系的荧光强度。采用改进的回归方法分析荧光强度的变化,计算结合常数和结合位点数。结果:两种杀虫剂均引起白蛋白荧光猝灭和血红蛋白荧光增强。毒死蜱和氯氰菊酯与白蛋白的结合常数和结合位点数分别是2.99×105和5.22×105L/mol,1.25和0.78。毒死蜱和氯氰菊酯与血红蛋白的结合常数和结合位点数分别是2.94×104和2.48×104 L/mol,1.75和2.19。结论:毒死蜱和氯氰菊酯可与白蛋白和血红蛋白结合,两种杀虫剂与白蛋白的结合显著强于与血红蛋白的结合。 细胞色素P450（CYP）是细胞内重要的Ⅰ相代谢酶,参与物质的排泄。但是,某些P450酶如CYP1A1和3A可将前致癌物氧化为亲电性致癌物,后者可形成DNA加合物,启动癌症发生。物质增强前致癌物激活的能力称助癌性。CYP2B1和3A可产生活性氧（ROS）攻击DNA。为研究毒死蜱和氯氰菊酯对CYP活性

论文目录

  • 致谢
  • 主要缩略语表
  • 摘要
  • 第1章 前言
  • 1.1.农药遗传毒性的研究现状
  • 1.1.1.农药对生物的遗传毒性
  • 1.1.2.农药遗传毒性产生的机制
  • 1.1.3.研究农药遗传毒性的方法
  • 1.2.毒死蜱和氯氰菊酯的理化性质、用途、生态毒性及降解
  • 1.2.1.毒死蜱
  • 1.2.2.氯氰菊酯
  • 1.3.毒死蜱和氯氰菊酯的毒理学研究现状
  • 1.3.1.毒死蜱
  • 1.3.2.氯氰菊酯
  • 1.4.本研究的选题依据、研究内容和目的意义
  • 1.4.1.选题依据
  • 1.4.2.研究内容
  • 1.4.3.研究目的和意义
  • 第2章 毒死蜱和氯氰菊酯与血液蛋白质的结合
  • 2.1.材料与方法
  • 2.1.1.试剂与仪器设备
  • 2.1.2.农药滴定和荧光测定
  • 2.1.3.结合常数和结合位点数的计算
  • 2.2.结果与讨论
  • 2.2.1.荧光强度的变化
  • 2.2.2.结合常数和结合位点数
  • 2.2.3.计算方法的修改
  • 2.3.小结
  • 第3章 毒死蜱和氯氰菊酯对小鼠细胞色素P450的影响
  • 3.1.材料与方法
  • 3.1.1.试剂与仪器设备
  • 3.1.2.动物处理和微粒体酶制备
  • 3.1.3.微粒体酶浓度的测定
  • 3.1.4.CYP1A1、1A2、2B1的测定
  • 3.1.5.CYP2E1的测定
  • 3.1.6.CYP3A的测定
  • 3.1.7.统计分析
  • 3.2.结果与分析
  • 3.2.1.对肝CYP的影响
  • 3.2.2.对肾CYP的影响
  • 3.2.3.对肺CYP的影响
  • 3.3.小结
  • 第4章 毒死蜱和氯氰菊酯处理后DNA链断裂的测定
  • 4.1.材料与方法
  • 4.1.1.试剂与仪器设备
  • 4.1.2.淋巴细胞的制备
  • 4.1.3.淋巴细胞的处理
  • 4.1.4.单细胞凝胶电泳
  • 4.1.5.统计分析
  • 4.2.结果与讨论
  • 4.3.小结
  • 第5章 毒死蜱和氯氰菊酯处理后DNA加合物和DNA-蛋白质交联的测定
  • 5.1.材料与方法
  • 5.1.1.试剂与仪器设备
  • 5.1.2.原代肝细胞的制备
  • 5.1.3.肝细胞处理
  • 5.1.4.自由DNA和来自DNA-蛋白质交联DNA的提取
  • 5.1.5.DNA加合物测定
  • 5.1.6.DNA-蛋白质交联测定
  • 5.1.7.统计分析
  • 5.2.结果与讨论
  • 5.3.小结
  • 第6章 毒死蜱和氯氰菊酯处理后DNA链间交联的测定
  • 6.1.材料与方法
  • 6.1.1.试剂与仪器设备
  • 6.1.2.原代肝细胞的制备
  • 6.1.3.肝细胞和小牛胸腺DNA的处理
  • 6.1.4.DNA的提取
  • 6.1.5.DNA链间交联的测定
  • 6.1.6.统计分析
  • 6.2.结果与讨论
  • 6.3.小结
  • 第7章 毒死蜱和氯氰菊酯处理时DNA的修复
  • 7.1.材料与方法
  • 7.1.1.试剂与仪器设备
  • 7.1.2.滤膜法
  • 7.1.3.提纯DNA法
  • 7.1.4.统计分析
  • 7.2.结果与讨论
  • 7.3.小结
  • 第8章 毒死蜱和氯氰菊酯对DNA甲基化水平的影响
  • 8.1.材料与方法
  • 8.1.1.试剂与仪器设备
  • 8.1.2.原代肝细胞的制备
  • 8.1.3.肝细胞的处理
  • 8.1.4.DNA的提取
  • 8.1.5.高效液相色谱分析
  • 8.1.6.统计分析
  • 8.2.结果与讨论
  • 8.3.小结
  • 第9章 毒死蜱和氯氰菊酯对小鼠睾丸和精子的影响
  • 9.1.材料与方法
  • 9.1.1.试剂与仪器设备
  • 9.1.2.小鼠处理，体重和睾丸重量测定
  • 9.1.3.精子畸形率测定
  • 9.1.4.统计分析
  • 9.2.结果与讨论
  • 9.3.小结
  • 结论
  • 参考文献
  • ABSTRACT

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