白蔹体外抗肿瘤活性成分筛选及作用机制研究

论文摘要

中药白蔹为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹（Ampelopsis japonic（Thumb.） Makino）的干燥块根,始载于《神农本草经》。其味苦、辛,微寒,具有清热解毒、消痈散结、敛疮生肌等功效,临床上多用于治疗痈疽发背,疔疮,瘰疬,烧烫伤等症状。现代药理学研究发现,该药具有抗菌、抗肿瘤、免疫调节及抑制毛发生长等作用。目前,关于白蔹的临床应用以及其药理活性研究大多还集中在抑菌作用方面,而它的抗肿瘤作用也已经开始引起大家的关注。本研究采用生物活性指导下的有效成分分离方法,分离筛选出白蔹抗肿瘤的活性部位及其活性成分,并探讨其抗肿瘤的作用机制,同时还研究了白蔹不同组分的急性毒性,为白蔹的进一步研究和开发提供科学依据。本文主要完成了以下工作：1采用MTT法,选择人肝癌细胞株HepG2以及乳腺癌细胞株A2480,对白蔹醇提物的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水溶液部位进行抗肿瘤活性研究,筛选出更加敏感的HepG2细胞株作为研究的受试对象。实验结果显示,乙醚部位和乙酸乙酯部位为白蔹抗肿瘤活性最好的两个部位。2采用硅胶柱层析,依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇对活性部位进行洗脱,分离得到五个部分。采用MTT法对这5个部分进行抗肿瘤活性的筛选,结果显示,乙醚和乙酸乙酯部分的抗肿瘤活性较其它三个部分更好,其中,乙醚部分抗肿瘤活性最佳。3采用硅胶柱层析、LH-20葡聚糖凝胶柱等现代色谱分离手段,以生物活性为指导进行分离,从活性最好的乙醚部分中共分离出7种化合物。再通过1H-NMR,13C-NMR等现代波谱方法,对分离出的单体化合物进行结构解析,最终确定了其中的5个化合物,它们为： β—谷甾醇（β-sitosterol）、齐墩果酸（oleanolic acid）、没食子酸（gallic acid）、棕榈酸(palmiticacid、白藜芦醇（resveratrol）4采用MTT法,对齐墩果酸、没食子酸、白藜芦醇进行抗肿瘤活性研究。结果显示,齐墩果酸、没食子酸、白藜芦醇对人肝癌细胞株HepG2均有抑制作用。其中齐墩果酸48小时的IC50为38.4mg·L-1,没食子酸48小时的IC50为18.3mg·L-1,白藜芦醇48小时的IC50为66.76mg·L-1。结果显示,没食子酸的抗肿瘤作用最强。5通过Annexin V-FITC/PI双标记法和JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位实验,研究探讨白蔹中没食子酸抗肿瘤的作用机制。结果显示,没食子酸可以通过降低肿瘤细胞的线粒体膜电位,最终诱导HepG2细胞的凋亡,并且凋亡的发生与坏死是相伴的。6通过急性毒性试验发现,白蔹水提组分、醇提组分、乙酸乙酯提组分和全组分不能测出LD50；经最大耐受量试验,测得4个组分的MTD值分别为120、154.2、696.6和3.75g·kg-1·d-1（按生药量计算）,分别相当于临床70kg成人每公斤体重日用量的930.9倍、1194.7倍、5398.6倍、29倍,显示白蔹具有较好的安全性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 综述
• 1 白蔹研究概况
• 1.1 化学成分研究
• 1.2 药理作用研究
• 1.3 临床应用
• 2 中药抗肿瘤作用机制研究进展
• 3 本文研究目的和主要内容
• 第二章 白蔹抗肿瘤活性部位筛选
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第三章 白蔹活性成分的分离纯化与结构鉴定
• 1 仪器及材料
• 2 白蔹活性部位的提取
• 3 白蔹活性部位的分离
• 4 单体化合物的结构鉴定
• 5 讨论
• 6 本章小结
• 第四章 单体化合物的抗肿瘤活性及作用机制研究
• 1 仪器及材料
• 2 单体化合物的抗肿瘤活性研究
• 3 没食子酸抗肿瘤作用机制研究
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第五章 白蔹不同组分小鼠急性毒性试验研究
• 1 仪器及材料
• 2 样品的制备
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 6 本章小结
• 第六章 结语
• 1 主要研究结果
• 2 本文创新之处
• 3 展望
• 参考文献
• 已发表和待发表文章
• 致谢
• 附图