论文摘要
支气管哮喘是危及全人类的一种严重疾病,其病因和发病机制目前尚未完全清楚。在治疗上非常棘手,只能控制,不能完全根除。免疫学机制研究表明哮喘患者存在Th1/Th2亚群比例失衡和功能失衡,Th2占优势,主要表现为Th2细胞的数量增多和功能亢进,是哮喘的始动机制和核心。巨噬细胞是免疫系统重要的细胞,有提呈抗原、清除异物及分泌多种细胞因子等作用。在通过共刺激分子和细胞因子信号途径激活和调节T细胞中发挥着独特的作用。一定条件下,能诱导Th1/Th2型应答的偏移,参与哮喘的发生发展。本实验主要定位于巨噬细胞,研究其对淋巴细胞分化的影响,以及临床常用的治疗哮喘药物茶碱对巨噬细胞的调节作用。目的:（1）在重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）作用下体外诱导培养人外周血单核源性巨噬细胞,并进行鉴定和功能检测。（2）探讨巨噬细胞对哮喘儿童Th细胞亚群（Th1/Th2）功能的影响,以及茶碱的调节作用。方法:（1）贴壁法分离人外周血单核细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基和rhGM-CSF培养7天。光镜、扫描电镜及透射电镜观察细胞形态,鸡红细胞吞噬试验检测吞噬功能,流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14等生物学技术鉴定贴壁细胞性质。（2）培养哮喘儿童单核源性巨噬细胞。分两组:抗原提呈组和茶碱干预组,茶碱干预组在培养过程中加入氨茶碱。两组巨噬细胞体外抗原活化后再与自体淋巴细胞共同培养3天,另设不参与反应的自身淋巴细胞对照组。流式细胞仪检测3组CD4+T细胞胞内细胞因子IFN-γ和IL-4水平,RT-PCR检测淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达。结果:（1）获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型,有吞噬功能,纯度较高。（2）与自身对照组和抗原提呈组相比,茶碱干预组淋巴细胞胞内IL-4水平和GATA-3 mRNA表达显著降低（P<0.05）,IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3比例明显升高（P<0.05）。抗原提呈组与自身对照组相比,各指标无统计学差异。3组间IFN-γ水平和T-bet mRNA表达无显著改变。结论:（1）人外周血单核细胞在rhGM-CSF诱导下向巨噬细胞分化,具有生物学活性,纯度较高,是一种简单易行的体外诱导培养巨噬细胞的方法。（2）茶碱可通过调节哮喘巨噬细胞的功能,下调淋巴细胞GATA-3 mRNA表达,抑制Th2分泌IL-4,从而抑制Th2功能以改善哮喘Th1/Th2失衡状态。
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