论文摘要
目的:p53是一种抑癌基因,在调控细胞周期、维持细胞稳定等方面具有重要作用。50%左右恶性肿瘤的发生都与p53基因的突变或缺失相关。近年来,MDM2（mouse double minute 2）和53BP1（p53 binding protein 1）作为p53的相关蛋白日益受到人们的重视。它们可以直接或间接影响p53的功能。本课题研究了MDM2启动子区SNP309、Del1518以及53BP1启动子区T885G、外显子区P909L、W1488G基因多态性,与中国河北高发区人群食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）和贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma, GCA）遗传易感性的关系。方法:采用基于人群的病例-对照研究方法,对563例肿瘤患者（351例ESCC,212例GCA）和642例健康对照个体,分别采集静脉抗凝血5ml,同时记录其病史、个人史、肿瘤家族史。以蛋白酶K消化—饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,分别采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism analysis,PCR-RFLP）和引物引入限制性内切酶分析-聚合酶链反应（primer-introduced restriction analysis-polymerase chain reaction, PIRA-PCR）的方法检测MDM2和53BP1相关多态性位点的基因型。数据统计分析采用SPSS11.5版软件包（SPSS Company,Chicago, Illinois, USA）进行, P<0.05认为有统计学意义。对各个基因型在健康对照组中的分布情况进行Hardy-Weinberg平衡分析（http:// www.kursus.kvl.dk/shares/vetgen/Popgen/ genetik/applets/kitest.htm）。病例组与对照组的基因型分布比较采用行×列表卡方检验。单体型频率及连锁不平衡分析采用EH软件和2LD软件（1.2 version,Rockefeller University,New York）。以非条件Logistic回归法计算经性别、年龄、吸烟状况和UGIC家族史多因素校正的相对风险度比值比（odds ratio,OR）及其95%可信区间（confidence interval,CI）。结果:1 MDM2 SNP309、Del1518与ESCC和GCA的关系1.1 ESCC和GCA患者组中上消化道肿瘤（ upper gastrointestinas cancers,UGIC）家族史阳性者的比例（分别为47%和49.1%）显著高于健康对照组（34.4%）（χ2=15.13, P=0.00;χ2=14.48,P=0.00）。ESCC和GCA患者组的吸烟者比例（分别为39.9%和46.7% ）与健康对照组（42.8%）相比均无显著性差异（χ2=0.81,P=0.37;χ2=0.97,P=0.33）。1.2健康对照组、ESCC组和GCA组中的MDM2、53BP1各多态位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。MDM2 SNP309和Del1518基因型频率在ESCC与健康对照组间无显著性差异（P >0.05）。而在GCA组中,携带MDM2 SNP309T等位基因的基因型（G/T+T/T）频率（52.8%）和携带Del1518-等位基因的基因型（+/- + -/-）频率（37.7%）明显低于健康对照组（分别为64.8%和51.7%）（χ2=9.67,P=0.00;χ2=12.47,P=0.00）。与SNP309 G/G基因型相比,携带T等位基因的基因型（G/T+T/T）可降低总体GCA的发病风险,经性别、年龄、吸烟状况和UGIC家族史多因素校正后的OR值为0.62（95%CI=0.45～0.87）;与Del1518+/+基因型相比,携带Del1518-等位基因的基因型（+/- + -/-）可降低总体GCA的发病风险,经性别、年龄、吸烟状况和UGIC家族史多因素校正后的OR值为0.57（95%CI=0.41～0.78）。1.3根据个体吸烟状况分层分析发现,与MDM2 SNP309 G/G基因型相比,携带T等位基因的基因型（G/T+T/T）可降低非吸烟组GCA的发病风险,经性别、年龄和UGIC家族史校正后的OR值为0.50（95%CI=0.32～0.77）;与+/+基因型相比,携带Del1518-等位基因的基因型（+/- + -/-）可降低非吸烟组GCA的发病风险,经性别、年龄和UGIC家族史校正后的OR值为0.52（95%CI=0.330.80）。该分层分析未发现MDM2 SNP309和Del1518对ESCC发病风险的影响。1.4根据有无UGIC家族史分层分析发现,与MDM2 SNP309 G/G基因型相比,携带T等位基因的基因型（G/T与T/T）可降低UGIC家族史阳性个体GCA的发病风险,经性别、年龄和吸烟状况校正后的OR值为0.53 （95%CI=0.33～0.86）,而不影响UGIC家族史阴性个体GCA的发病风险;与+/+基因型相比,携带Del1518-等位基因的基因型（+/- + -/-）可分别降低UGIC家族史阳性和阴性组GCA的发病风险,经性别、年龄和吸烟状况校正后的OR值分别为0.59（95%CI=0.37～0.96）和0.56（95%CI=0.36～0.86）。但该分层分析未发现MDM2 SNP309和Del1518对ESCC发病风险的影响。1.5应用EH和2LD软件对MDM2 SNP309和Del1518位点进行联合分析显示,两个多态性位点间存在连锁不平衡现象（D’=0.76,χ2=440.41, P=0.00）。SNP309G等位基因型易与Del1518+等位基因型连锁。MDM2单体型在GCA和健康对照组间存在显著性差异（χ2=20.44, P=0.00）,而在ESCC组和健康对照组间分布相似（P>0.05）。与SNP309G/Del1518+单体型相比,携带SNP309T/Del1518-单体型可显著降低GCA的发病风险,OR值为0.51（95% CI=0.38～0.70）。2 53BP1 P909L、W1488G、T885G与ESCC和GCA关系2.1 ESCC、GCA患者组中上消化道肿瘤（ upper gastrointestinas cancers,UGIC）家族史阳性者的比例（分别为47.3%和46.2%）显著高于健康对照组（34.6%）（χ2=15.09, P=0.00;χ2=10.83,和P=0.00）。ESCC和GCA患者组的吸烟者比例（分别为40.1%和48.0% ）与健康对照组（43.0%）相比均无显著性差异（χ2=0.77,P=0.38;χ2=1.95,P=0.16）。2.2 53BP1外显子区P909L和W1488G在健康对照组、ESCC和GCA患者组中均只存在单一的等位基因,不适于疾病的筛查工作。53BP1启动子区T885G基因型总体分布在ESCC、GCA患者组及健康对照组均无显著性差异（P >0.05）。2.3根据个体吸烟状况和有无UGIC家族史分层分析均未发现53BP1 T885G对ESCC和GCA发病风险的影响（P>0.05）。2.4将53BP1 T885G与P53 Arg72Pro联合分析显示,在携带Pro等位基因（Arg/Pro+Pro/Pro）组中,53BP1 T885G的G/G基因型可降低GCA的发病风险（OR值经多因素校正后为0.74,95%CI=0.570.95）,而不影响ESCC的发病风险。结论:1上消化道肿瘤家族史明显增加ESCC、GCA的发病风险。2与MDM2 SNP309 G/G基因型相比,携带T等位基因的基因型（G/T与T/T）可降低总体GCA的发病风险。3与MDM2 Del1518+/+基因型相比携带Del1518-等位基因的基因型（+/-与-/-）可降低总体GCA的发病风险。4 MDM2 SNP309和Del1518位点间存在连锁不平衡,SNP309G等位基因型易与Del1518+等位基因型连锁。与SNP309G/Del1518+单体型相比,携带SNP309T/Del1518-单体型可显著降低GCA的发病风险。5 53BP1外显子区P909L和W1488G只存在单一等位基因,不适合疾病的筛查;53BP1启动子区T885G不单独影响高发区ESCC、GCA的发病风险。6同时携带P53 Pro等位基因和53BP1 T885G G/G基因型可降低GCA的发病风险。