论文摘要
目的:测定不同浓度雌激素对体外培养人大网膜脂肪细胞瘦素、脂联素mRNA表达的影响。方法:1.选择择期开腹手术病人,无菌条件下新鲜切取腹部大网膜脂肪组织,经胶原酶消化分离人前脂肪细胞。用DMEM/F12（1:1）培养基在37℃、5%CO2条件下培养,并诱导分化为成熟脂肪细胞。2.对脂肪细胞进行干预:用不同浓度的雌二醇（1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L）干预24h;选取高浓度组,即雌二醇100nmol/L干预12h、24h、48h。用细胞形态学和油红O染色法鉴定细胞,用半定量反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测脂肪细胞瘦素、脂联素mRNA表达水平。3.数据用均数±标准差（ x±S）表示,采用完全随机设计的单因素方差分析（One-way ANOVA）进行处理,P<0.05为有统计学意义。结果:1.成功地培养出人大网膜前脂肪细胞。培养出的梭形细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高,经细胞形态学的动态观察及油红O脂肪染色抽取法的鉴定,证明是功能活跃的前脂肪细胞。2.半定量RT-PCR法扩增瘦素、脂联素mRNA（348bp、124bp）,结果表明:①雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范围内以剂量依赖性方式促进瘦素表达,最高达对照组的1.68倍。②雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范围内以剂量依赖性方式抑制脂联素表达,抑制率最高达对照组的51.8%。③雌二醇100nmol/L在12h-48h范围内以时间依赖性方式促进瘦素表达。④雌二醇100nmol/L在12h-48h范围内以时间依赖性方式抑制脂联素表达。3.瘦素与脂联素的表达呈负相关。结论:1.使用胶原酶消化的方法分离并原代培养了人大网膜前脂肪细胞,验证了本实验室建立的细胞培养模型的可行性及实用性,为研究各种激素对脂肪细胞因子的作用提供了基础。2.离体状态下雌激素促进脂肪细胞瘦素mRNA表达、抑制脂联素mRNA表达,为更深入研究肥胖及2型糖尿病发病的性别差异提供依据。
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