白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

论文摘要

背景心肌细胞外的钙离子进入细胞内以及细胞内的钙转运受到细胞膜和肌浆网上诸多蛋白质的调控,维持着细胞内钙离子浓度的动态平衡状态。细胞内的钙离子浓度异常不但影响兴奋-收缩耦联的过程,还可以引发心律失常,影响心肌的能量代谢,作为第二信使,影响细胞增殖,分化的多种通路以及影响线粒体的氧化磷酸化酶等多种作用。心肌细胞膜的表面存在两种电压调控的钙通道:L-及T-型钙通道。L-型钙通道由于其电导较大及通道开放时间长而得名,是胞外钙离子进入细胞的主要通道,而T-型钙通道则源于其低电导和短暂的通道开放时间。生理情况下,大多数哺乳动物在出生后不久,心室肌细胞的T-型钙通道逐渐的减少甚至消失,成年哺乳动物的心室肌细胞中常缺如,但少数动物如豚鼠成年后心房及心室肌细胞内仍可表达此通道。已有的研究报道白藜三醇不仅对急性分离的豚鼠心室肌细胞的ICa-L有抑制的作用,而且对INa,Iks,Iss,Ito均具有抑制作用且呈浓度依赖性,初步显示出白藜三醇具有延长动作电位时程和心室有效不应期,减少室性心律失常发生的潜在作用。为了进一步探讨白藜三醇抑制心律失常发生的可能机制、了解其对心室肌细胞钙电流的慢性作用,本研究采用全细胞膜片钳技术观察白藜三醇对培养不同时间的豚鼠心室肌细胞钙电流密度的变化。目的研究白藜三醇干预豚鼠心室肌细胞不同时间后钙电流密度的变化,探讨该药物的可能作用机制。方法1.豚鼠心室肌细胞的分离与培养:雄性成年豚鼠,体重250～350g,应用Langendorff心脏灌流装置上逆行灌流,酶解分离出单个心室肌细胞,接种于培养皿中,加入受试药物白藜三醇,分为对照组,低剂量浓度组（RES 10μM）,中剂量浓度组（RES 30μM）,高剂量浓度组（RES100μM）,分别孵育24、48和72小时。2.采用全细胞膜片钳技术,分别记录不同时间点的L-和T-型钙通道电流。结果1.白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流密度的作用（1）培养72h时,RES 30μM和RES 100μM使ICa-L密度分别下降13%和27%,呈现出浓度依赖性抑制趋势,RES 100μM组与对照组之间有统计学差异（2.54±0.35pA/pF vs.3.48±0.42 pA/pF,P＜0.05）;（2）RES 10μM,RES 30μM和RES 100βM对ICa-L密度的抑制作用呈现时间依赖性,RES 100μM在72h和24h之间有统计学差异（2.54±0.35 pA/pF Vs.3.33±0.48 pA/pF,P＜0.05）;2.白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞T-型钙电流密度的作用（1）T-型钙电流密度在同一作用时间点呈现出随着白藜三醇浓度的增大,电流呈减少趋势,在72h时,RES 100μM组与对照组之间有统计学差异（2.61±0.64 10pA/pF vs.4.79±0.67 10pA/pF,P＜0.05）;（2）同一浓度的白藜三醇在不同作用时间点（24h,48h,72h）,T-型钙电流密度均呈现出随着时间的延长而减少的趋势,但未显示出统计学差异。结论白藜三醇可以呈现浓度和时间依赖性地抑制培养豚鼠心室肌细胞钙电流趋势。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 参考文献
• 第一部分 白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响
• 前言
• 第一节 成年雄性豚鼠心室肌细胞的分离和培养
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二节 白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞T-型钙电流的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 小结
• 附录
• 综述
• 致谢