论文摘要
引言：睡眠分为快眼动睡眠（rapid eye movement sleep，REMS）和非快眼动睡眠（non REMS）。而REMS和NREMS在睡眠周期中所占的比例在新生期和成年期也有着很大的区别。新生期睡眠是以REMS在发育早期（初生期）最多，随着发育成熟而逐渐减少为主要特征的。虽然在成年人和动物，胆碱能神经元被认为是主要的REM睡眠的调节神经元，已有实验证实脑桥网状结构及脚桥被盖核胆碱能神经元在REMS的触发和维持中起着关键作用，然而，胆碱能神经元对于幼年期REM睡眠的作用仍有待进一步的研究。这是因为新生大鼠脑内的胆碱能递质浓度是非常低的，随着发育成熟而逐渐升高，这与REMS的变化趋势恰好相反。现有研究表明，促肾上腺皮质激素释放因子（corticotropin-releasing factor，CRF）的脑内含量与REMS在发育过程中的变化呈平行关系，而且在人类抑郁症患者也发现有脑脊液CRF水平、血ACTH水平和皮质醇水平的升高。有可靠证据提示此类患者多数有REMS增多的倾向。而且给睡眠剥夺72小时的大鼠侧脑室注射CRF后可显著增加REMS反跳。CRF拮抗剂可以阻断睡眠剥夺导致的REMS反跳。上述现象促使我们提出这样的假设：CRF可能是促发幼年期高比例REM睡眠的重要因素之一。据此，我们提出这样的问题：使用CRF R1受体阻断剂后，是否会导致发育期大鼠快眼动睡眠减少?目的：本研究拟用多导睡眠描记结合使用免疫荧光测量法，观察对幼年（新生）大鼠注射CRF R1受体拮抗剂NBI27914后，其睡眠／觉醒周期的变化，并检测阻断剂注射后动物不同脑区组织内乙酰胆碱（ACh）的含量，探讨CRF在幼年大鼠REMS发生和维持中的作用，分析其可能机制。方法：本实验分两部分第一部分选用出生后13天的幼年大鼠，在乙醚麻醉下行脑电（electroencephalogram，EEG）和颈部肌电（electromyogram，EMG）电极安装术。手术恢复12小时后开始连续12小时的EEG和EMG描记，采集的EEG和EMG信号经过模／数及数／模转换输入计算机显示并记录，在记录的第6小时分别给予腹腔注射三个剂量的NBI27914（12.5mg／kg、25mg／kg和50mg／kg）、阿托品（6mg／kg）和等量生理盐水。第二部分出生后14天幼年大鼠，注射25mg／kg的NBI27914后1小时断头处死，取其额叶皮质、顶叶皮质、丘脑、下丘脑、脑桥、中脑。使用荧光ELISSA方法分别进行荧光免疫分析，测定组织内ACh的含量。使用SPSS（11.0版本）软件进行统计处理，睡眠／觉醒记录资料和免疫荧光定量数据以均数加减标准误（（?）±SE）表示。资料处理使用单因素方差分析（one way ANVOA）及F-检验或t-test检验。P＜0.05表示差异具有显著性。结果：1．与基础水平相比，对幼年大鼠腹腔注射NBI27914后6小时内，REMS的变化在不同剂量组的比较结果显示随着NBI浓度的增加，相对应的实验组REMS相应减少。与给药前6小时相比，给药后6小时平均总REMS在NBI12.5mg／kg组减少35.57％，在NBI25mg／kg组减少48％，在NBI50mg／kg组减少53％。给药前后及给药后与对照组相比，差异均有显著性（P＜0.05）。在REMS减少的同时，觉醒在NBI 50mg／kg组、NBI 25mg／kg和NBI 12.5mg／kg组有所增加，分别增加约为7.78％、7.98％（P＜0.05）和5.63％（P＞0.05）。NREMS在NBI50mg／kg组、NBI 25mg／kg和NBI12.5mg／kg组均有增加，分别为11.37％、10.23％和8.92％（P＜0.01）。2．考虑胆碱能系统对睡眠觉醒周期的作用，我们使用阿托品——M1受体阻断剂，观察其对幼鼠睡眠的影响。在幼年大鼠腹腔注射阿托品（6mg／kg）后，与对照组相比，REMS减少约49.00％。差异有显著性（P＜0.01）。REMS的减少主要伴随着觉醒的增加（37％，p＜0.01）而不是NREMS的增加（18％，p＞0.05）。给药前后及给药后与对照组相比差异均有显著性（P＜0.005）。3．与对照组相比，注射NBI27914后，丘脑和中脑组织内ACh含量分别减少了6.58％和10.54％。单因素方差分析各组间无显著性差异。结论：本实验首次发现阻断CRF R1受体可以剥夺幼鼠的REM睡眠。该结果表明CRF和胆碱能系统在大鼠新生期对REMS起调节作用，但其作用特点有异。这提示，CRF和胆碱能神经元可能通过不同的机制对REM睡眠进行调节。
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标签：幼年大鼠论文; 快眼动睡眠论文; 促肾上腺皮质激素释放因子论文; 阿托品论文; 乙酰胆碱论文;