鸡抗RA蛋黄抗体消除油乳剂灭活疫苗免疫空白期的研究

论文摘要

自詹拉发明牛痘苗以来,疫苗是防控疫病的主要武器。根据微生物是否成活,疫苗被分为活疫苗和灭活疫苗两大类。研究表明,动物接种疫苗后需要经过一定时间才能产生出坚强免疫力。在疫苗学中,将疫苗接种至免疫力产生需要的时间称为诱导期。在诱导期内,动物处于易感状态,如遇病原侵袭则发病,因此这一时期又被称之为免疫空白期。灭活疫苗因其微生物被杀灭,通常认为安全性好,加之采用矿物油等佐剂,使之免疫期也较长,在动物防疫中广泛应用。灭活疫苗最大的问题是,诱导期通常为10-14天,接种后免疫空白期太长,时有免疫失败发生。解决灭活疫苗免疫空白期问题显然为生产实际所急需。我们提出解决这一问题新思路,即应用已经可以商品化规模化生产的鸡特异蛋黄抗体与灭活疫苗或同时注射或制成特殊混合制剂,其中的抗体被快速吸收后可在数小时内产生被动免疫保护,抗体的保护作用递降后,灭活疫苗诱导的主动免疫发挥作用。这样就可以保证免疫接种后诱导期为零,实现消除灭活疫苗的免疫空白期效果。本研究用鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）为模式菌,免疫鸡获得其特异蛋黄抗体,然后与其油乳剂灭活疫苗同时注射,攻毒试验结果证明,灭活疫苗诱导的主动免疫保护与抗体吸收后的被动免疫实现了叠加,消除了免疫空白期。鸭传染性浆膜炎（Infectious serositis,IS）是鸭的重大疫病之一,各种年龄均可发病,以1-8周龄发病率（Morbility,Mb）和死亡率（Mortality,Mt）高,经济损失很大。IS的病原是RA,有21个血清型,型间缺乏交叉免疫保护,主要流行血清型为1、2、5等。RA活疫苗和灭活疫苗均有文献报道,以后者为主。雏鸭接种RA灭活疫苗后,免疫空白期为10-14天,常以使用RA敏感抗生素弥补防疫空白,生产实际中存在滥用现象,导致耐药菌产生和药物残留,影响食品安全。因此,研究RA蛋黄抗体与其灭活疫苗同时注射的免疫效果对于养鸭业具有重大意义。本文选择川渝地区RA流行主要血清型中的强毒力AF株作为疫苗制备和抗体制备菌种,测定其对不同日龄不同品种肉鸭的易感性、免疫原性和制备的油乳剂灭活疫苗免疫后对肉鸭血细胞和增重的影响,最后开展了特异蛋黄抗体消除免疫空白期试验。研究取得了以下主要结果。1.AF株RA毒力AF株RA对16日龄花边肉鸭的LD50为4.8×106.98CFU。该菌株对不同日龄的花边肉鸭和樱桃谷肉鸭的毒力存在差异,对14-43日龄花边肉鸭有很强致病力,除14日龄为63.6%和36.4%外,其他日龄的发病率和死亡率均达到或超过80%和60%。对14-55日龄樱桃谷肉鸭致病力更强,除55日龄为54.5%和36.4%外,14、20、35日龄组发病率和死亡率均达到或超过90%和80%,28日龄组发病率和死亡率均超过50%。试验结果表明,18-20日龄是AF株RA感染花边肉鸭和樱桃谷肉鸭的最敏感时期。2.AF株RA油乳剂灭活疫苗的免疫诱导期和保护期AF株RA对4日龄花边肉鸭的适宜免疫菌量是菌液浓度A525值为1.944。此剂量组攻毒保护率最高能达到100%。RA油乳剂灭活疫苗接种1.0mL/只和2.0mL/只的保护效果好,但若接种2.0mL/只,剂量太大,可能会导致吸收不完全。AF株RA油乳剂灭活疫苗免疫4日龄花边肉鸭和樱桃谷肉鸭后,疫苗免疫诱导期约为10天,即接种疫苗后10天保护率可达80%左右。4日龄樱桃谷肉鸭接种AF株RA油乳剂灭活疫苗后50天,仍能达到80%以上的保护效果。3.鸡抗AF株RA特异蛋黄抗体（RA-cIgY）保护率消长规律AF株RA油乳剂灭活疫苗免疫蛋鸡,收集不同时期RA-cIgY。4日龄雏鸭注射RA-cIgY1mL后20日龄攻毒,结果是,二免后8-15天和16-25天收集的RA-cIgY组Mb为45.5%,Mt为36.4%;三免后1-14天和15-28天收集的RA-cIgY组发病率和死亡率均显著降低,保护指数均超过60;三免后29-42天和43-51天保护指数最高也只达到50。由此可知,AF株RA油乳剂灭活疫苗给蛋鸡进行三免后1-28天收集的RA-cIgY保护效果最好。4.RA-cIgY弥补油乳剂灭活疫苗免疫空白期AF株RA灭活抗原三免后1-28天收集的RA-cIgY 1mL与AF株RA油乳剂灭活疫苗1mL同时注射4日龄雏鸭,于免疫后31天,即35日龄攻毒,保护指数约为88,与AF株RA油乳剂灭活疫苗单独接种组保护指数约83差异不明显.RA-cIgY 1mL的发病率和死亡率与攻毒对照组相差不大,无保护率。试验结果显示,RA-cIgY对AF株RA油乳剂灭活疫苗免疫保护效果没有影响。10日龄和16日龄雏鸭同时注射RA-cIgY 1mL与AF株RA油乳剂灭活疫苗后4天,即14日龄或20日龄攻毒,试验组保护指数均为100,同时设置的RA-cIgY 1mL组保护指数约为80,AF株RA油乳剂灭活疫苗1mL保护指数为约为50。实验结果表明,AF株RA油乳剂灭活疫苗免疫后4天没有诱导出免疫保护效果,RA-cIgY无论单独注射还是与AF株RA油乳剂灭活疫苗同时注射均产生出良好的被动免疫保护效果,在灭活疫苗免疫空白期起到了免疫保护效果。RA-cIgY与油乳剂灭活疫苗同时注射实现了零免疫空白期的免疫效果。本研究为解决灭活疫苗因为免疫空白期而出现的免疫失败提供了有效的解决思路和技术。我们认为,该技术在禽类的灭活疫苗上具有通用性,也许可以广泛推广应用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第1章 文献综述
• 综述一、鸭传染性浆膜炎研究进展
• 综述二、鸭传染性浆膜炎疫苗研究进展
• 综述三、卵黄抗体研究进展
• 第2章 引言
• 第3章 制苗菌种毒力的测定
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 第4章 AF株RA油乳剂灭活疫苗的制备及免疫效力测定
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 第5章 AF株RA油乳剂灭活疫苗接种对鸭生长的影响
• 5.1 材料
• 5.2 方法
• 5.3 结果
• 5.4 讨论
• 第6章 抗体消除油乳剂灭活疫苗免疫空白期的研究
• 6.1 材料
• 6.2 方法
• 6.3 结果
• 6.4 讨论
• 第7章 结论与展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 在校期间发表的文章