论文摘要
当细胞受到辐射时,某些编码转录因子的短暂早期基因被激活。这些被激活的基因包括早期生长反应因子基因家族。这些基因可感受X射线产生的氧自由基的诱导而引起细胞的反应。以前的研究证明Egr-1被辐射诱导是由Egr-1启动子区所含的6个CC（A+Trich）6GG（CArG）模体介导。我们可以利用这个放射诱导启动子来控制肿瘤组织内的Bax的表达。 在Bcl-2家族中,Bax是促凋亡蛋白。Bax以无活性状态存在于细胞浆内。在被不同刺激诱导后,Bax的构象发生改变并转移到线粒体上。在线粒体膜上,它形成低聚物并使线粒体膜形成孔,使细胞色素c和其它细胞毒性因子可以排出。因此,Bax的活性调控就成为细胞是否死亡的关键因素。在Bax与其它Bcl-2成员之间的反应成为了此调控的关键。当Bcl-2过表达时,Bax与Bcl-2形成异源二聚体,细胞继续生存。当Bax过表达时,Bax本身形成同源二聚体,细胞凋亡。 我构建一个由Egr-1启动子上游连接Bax cDNA的质粒,它可以在受到辐射后被激活而引起Bax表达,从而提高放射诱导凋亡。 第一部分 Egr-1启动子和Bax α cDNA的制备 为了构建放射诱导基因表达系统,我从BALB/c小鼠的基因组中提取Egr-1启动子的基因序列。通过RT-PCR,我从乳腺癌细胞中提取Bax α基因序列。 第二部分 pEgr-Bax表达载体的构建和鉴定 为了研究放射诱导Bax基因表达的可能性,我构建了一个pEgr-Bax表达载体。当它受到辐射时可提高Bax基因的表达。我从pIRES-EGFP质粒中剔除CMV,代之为Egr-1启动子。然后将Bax cDNA连接到pIRES-EGFP质粒的多克隆位点上。通过PCR测定Egr-1启动子和Bax cDNA的序列长度分别为476bp和593bp。通过测序证明碱基序列正确。这个载体构建成功可以为肿瘤治疗提供一种方法。
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