梅花鹿胶原蛋白制备及治疗骨质疏松症作用研究

论文摘要

目的:以梅花鹿鹿骨和鹿角脱盘为原料,建立胶原蛋白提取工艺,对其理化性质和治疗骨质疏松症药理活性进行研究,为今后梅花鹿产品开发奠定基础。方法:采用水煎煮法和胰蛋白酶酶解法制备鹿骨胶原蛋白、鹿角脱盘胶原蛋白,采用单因素和正交试验确定鹿骨胶原蛋白和鹿角脱盘胶原蛋白提取的最佳工艺。采用摘除双侧卵巢法建立骨质疏松模型,术后7d开始给药,连续给药90d后,分别观察鹿骨胶原蛋白和鹿角脱盘胶原蛋白对骨质疏松大鼠骨密度、血清指标、骨组织形态计量学参数、骨力学指标、体重及脏器系数的影响。结果:1、采用单因素实验和正交试验优化得到鹿骨胶原蛋白提取的最佳工艺:料液比为1:5,水煮时间3.5h,水煮3次;采用SDS-PAGE确定胰蛋白酶的用量为酶与底物比1:5000,酶解1h,提取率为5.11%,蛋白含量约为80.59%。2、采用单因素试验和正交试验优化得到鹿角脱盘胶原蛋白提取的最佳工艺:料液比1:5,水煮5h,提取4次;采用高效液相凝胶色谱法确定胰蛋白酶的用量为酶与底物比1:10000,酶解1.5h,提取率为收率为22.31%,平均蛋白含量为66.32%。3、与模型对照组比较,经鹿骨胶原蛋白和鹿角脱盘胶原蛋白治疗后,去卵巢所致骨质疏松大鼠骨密度、血清中ALP和Hyp、骨组织形态学参数及骨力学指标均有显著性差异,而血清中E2,体重和脏器系数没有统计学意义。结论:1、本实验采用单因素实验和正交试验分别建立了简便、快速、高提取率的梅花鹿鹿骨胶原蛋白和鹿角脱盘胶原蛋白提取工艺。2、鹿骨胶原蛋白和鹿角脱盘胶原蛋白对去卵巢所致的骨质疏松大鼠有一定的治疗作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 前言
• 文献综述
• 1 胶原蛋白研究概述
• 2 胶原降解
• 3 胶原蛋白的应用
• 4 胶原蛋白与骨质疏松
• 5 鹿骨、鹿角脱盘研究现状
• 实验研究
• 一 梅花鹿胶原蛋白提取工艺研究
• 1 实验材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 鹿骨胶原蛋白的制备
• 2.2 鹿角脱盘胶原蛋白的制备
• 3 实验结果
• 3.1 鹿骨胶原蛋白制备工艺的确定
• 3.2 鹿角脱盘胶原蛋白制备工艺的确定
• 4 讨论
• 二 梅花鹿胶原蛋白理化性质研究
• 1 实验材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 胶原蛋白中蛋白质含量测定
• 2.2 鹿骨胶原蛋白、鹿角脱盘胶原蛋白分子量测定
• 2.3 鹿骨胶原蛋白、鹿角脱盘胶原蛋白氨基酸成分分析
• 3 实验结果
• 3.1 鹿骨胶原蛋白理化性质
• 3.2 鹿角脱盘胶原蛋白理化性质
• 4 讨论
• 三 梅花鹿胶原蛋白对去卵巢所致骨质疏松大鼠的实验研究
• 1 实验材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 大鼠造模
• 2.2 实验分组与给药
• 2.3 检测指标
• 2.4 统计方法
• 3 实验结果
• 3.1 鹿骨胶原蛋白对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用
• 3.2 鹿角脱盘胶原蛋白对去卵巢所致骨质疏松的治疗作用
• 4 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 发表文章