树枝状大分子修饰的毛细管电色谱的制备与应用研究

论文摘要

本文在开管毛细管内壁上以3—氨丙基三乙氧基硅烷做硅烷化试剂,丙烯酸甲酯为马氏加成试剂,乙二胺为酰胺化试剂,通过多次重复马氏加成反应、酰胺化反应,成功键合了聚酰胺—胺(PAMAM)树枝状大分子,制得了1代、2代、3代PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱。随着大分子代数的增加,毛细管电渗流(EOF)逐步下降。在石英硅片上采用相同的环境和条件键合了1到3代PAMAM,通过对硅片的扫描电镜和电子能谱图,证明了树枝状大分子PAMAM键合的成功。 本文利用制得的1代、2代、3代PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱对丙氨酸、脯氨酸的分离进行对比,结果显示,随着大分子PAMAM代数的增加,分离度逐步增大,在3代树枝状大分子PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱上,丙氨酸和脯氨酸的分离度大于1.5。通过实验证明该方法制得的PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱具有良好的重现性、稳定性和较长的寿命,分离效率可以达到3.0×10~5块/米。利用3代PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱,采用非衍生化法,成功分析了精氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸和组氨酸。 本文在3代PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱的端氨基上键合了RNA配体,获得了以树枝状大分子PAMAM为间隔臂,RNA为配体的新型亲和毛细管电色谱柱。采用紫外吸收光谱法和电子能谱进行了表

论文目录

• 符号说明
• 一、前言
• 1.1 毛细管电色谱
• 1.1.1 毛细管电色谱的特点
• 1.1.2 亲和毛细管电色谱
• 1.2 毛细管电色谱柱
• 1.2.1 填充毛细管柱
• 1.2.2 开管毛细管柱
• 1.2.2.1 涂渍聚合物固定相
• 1.2.2.2 表面粗糙化键合固定相
• 1.2.2.3 溶胶-凝胶（Sol-gel）技术
• 1.2.2.4 其它键合固定相
• 1.2.3 整体电色谱柱
• 1.3 树枝状大分子
• 1.3.1 树枝状分子的历史
• 1.3.2 树枝状分子的合成
• 1.3.3 树枝状分子的特点
• 1.3.4 树枝状分子的应用
• 1.4 本课题的提出
• 二、PAMAM修饰柱的合成与表征
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 合成路线
• 2.3 合成方法
• 2.3.1 毛细管内的合成
• 2.3.2 石英硅片上的合成
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 合成条件的影响
• 2.4.1.1 反应介质的选择
• 2.4.1.2 反应温度的影响
• 2.4.1.3 端官能团水解
• 2.4.1.4 反应时间的影响
• 2.4.1.5 试剂的用量
• 2.4.1.6 过量试剂的去除
• 2.4.2 PAMAM修饰柱的表征
• 2.4.2.1 扫描电镜表征
• 2.4.2.2 电子能谱表征
• 2.4.2.3 不同修饰柱的电渗流比较
• 2.5 结论
• 三、PAMAM柱分离氨基酸
• 3.1 前言
• 3.2 仪器与试剂
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 3G PAMAM修饰的开管毛细管电色谱柱对丙氨酸和脯氨酸的分离
• 3.4.1.1 缓冲溶液的选择
• 3.4.1.2 缓冲溶液的浓度选择
• 3.4.1.3 缓冲体系pH值的选择
• 3.4.1.4 电压的选择
• 3.4.1.5 温度的选择
• 3.4.2 空毛细管、键合KH550，1G，2G，3G PAMAM管分离丙、脯氨酸效果比较
• 3.4.3 开管毛细管电色谱柱的评价
• 3.4.3.1 不同修饰柱的电渗流随缓冲溶液pH值的变化
• 3.4.3.2 合成毛细管柱的重现性和柱效的评价
• 3.4.3.3 合成毛细管柱的稳定性和寿命评价
• 3.4.4 利用3G PAMAM修饰柱分离5种氨基酸
• 3.5 结论
• 四、键合配体的PAMAM柱制备与应用
• 4.1 前言
• 4.2 仪器与试剂
• 4.3 反应路线
• 4.4 实验方法
• 4.4.1 合成方法
• 4.4.2 亲和色谱分析方法
• 4.5 结果与讨论
• 4.5.1 键合结果表征
• 4.5.1.1 紫外光谱法表征
• 4.5.1.2 电子能谱表征
• 4.5.2 分析溶菌酶与核糖核酸酶A
• 4.5.2.1 电泳分析条件
• 4.5.2.2 溶菌酶和核糖核酸酶A的分析
• 4.6 结论
• 五、结论与展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文