亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞金属硫蛋白含量及其基因表达的影响

论文摘要

目的:了解不同剂量不同染毒时间,亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞存活率、DNA损伤情况、金属硫蛋白（MT）含量及其基因表达的影响,及MT含量与细胞存活率、DNA损伤的相关性。方法:无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠（2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组）作用于淋巴细胞,采用四噻唑蓝还原法测定不同染毒时间（24h、48h、72h）各染毒剂量组淋巴细胞存活率;采用单细胞凝胶电泳法测定DNA损伤情况;采用银饱和-血红蛋白原子吸收法测定各组MT含量;采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MT-1、MT-2基因表达情况。结果:低浓度亚砷酸钠（2、5μmol/L）组细胞存活率较对照组增高（P<0.05）;其它各组细胞存活率随染毒剂量增高而降低,与对照组及2、5μmol/L组比较存在统计学差异（P<0.05）;不同剂量不同染毒时间亚砷酸钠对淋巴细胞DNA损伤程度不全相同,并存在时间-剂量交互作用（P<0.05）,其中在所有检测时间,30、60μmol/L染毒组DNA损伤情况高于对照及其它各组（P<0.05）,15μmol/L染毒组在染毒72 h时DNA损伤情况与对照组相比有统计学意义（P<0.05）。不同剂量亚砷酸钠染毒一定时间后细胞MT含量增加,且存在时间-剂量交互作用（P<0.05）,MT含量在染毒48小时左右达到高峰。其中2、5μmol/L组MT含量高于对照组及其它各剂量组。不同剂量亚砷酸钠作用72h,MT-1基因表达与对照组相比无统计学差异（P>0.05）;MT-2基因表达各染毒组不全相同（P<0.05）,低剂量（2、5μmol/L）染毒组细胞MT-2表达上调（P<0.05）,其它各剂量组MT-2表达改变与对照组相比无统计学意义（P>0.05）。24h染毒各剂量组MT含量与细胞存活率之间无相关关系（P>0.05）;而48h、72h染毒时间各剂量组MT含量与细胞存活率之间存在正相关（r分别为0.898、0.872, P均<0.05）,与细胞DNA损伤间无相关关系（P>0.05）。结论:低剂量砷可促进淋巴细胞的体外存活,并可诱导其MT合成增加,淋巴细胞MT含量增加可能主要由MT-2表达上调所致。MT表达上调可能是低剂量砷促进细胞存活的机制之一,未发现低剂量的砷可以导致淋巴细胞DNA单链断裂,尚不能认为MT表达上调对DNA单链损伤有保护作用,MT表达上调可能是低剂量砷的环境化学物的毒物兴奋效应的重要机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 受试细胞
• 1.2 受试药物
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要工作液
• 2 方法
• 2.1 淋巴细胞的分离
• 2.2 淋巴细胞的鉴定
• 2.3 细胞染毒分组
• 2.4 淋巴细胞存活率检测
• 2.5 DNA 损伤检测
• 2.6 MT 含量及 MT 基因表达的测定
• 3 统计学处理
• 4 质量控制
• 结果
• 2对淋巴细胞形态的影响'>1 NaAsO₂对淋巴细胞形态的影响
• 2对淋巴细胞存活率的影响'>2 NaAsO₂对淋巴细胞存活率的影响
• 2对淋巴细胞 DNA 损伤的检测结果'>3 NaAsO₂对淋巴细胞 DNA 损伤的检测结果
• 4 不同染毒剂量和时间对淋巴细胞 MT 含量的影响
• 5 MT 含量与细胞存活率的关系
• 6 MT 含量与 DNA 损伤的关系
• 7 砷对 MT 基因 mRNA 表达的影响
• 讨论
• 1 砷与环境化学物的毒物兴奋效应
• 2 砷与 DNA 损伤
• 3 砷对 MT 含量及其基因表达的影响
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述 砷对神经系统损伤的研究进展
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表