论文摘要
乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）是HBV复制早期即开始合成一种中间体，由cccDNA反转录形成pgRNA及其他一系列RNA，开始病毒的复制增殖，cccDNA存在及数量标志着HBV的复制和复制的活跃程度。cccDNA的检测在HBV清除机制研究、抗HBV药物机制及药效学研究、对不同的乙型肝炎患者病情变化的监测均有重要的应用价值。但由于其结构上和生物学方面的特殊性，cccDNA特异性检测一直存在较大的难度。自二十世纪90年代初，不断有学者发明新的cccDNA特异性检测方法，但均未能推广。另外，目前有关cccDNA的研究数据大多通过鸭、土拨鼠、黑猩猩等实验动物模型和细胞模型中获得，而直接从慢性乙型肝炎患者等临床病人中获得的资料仍然比较缺乏。本课题从目前有关cccDNA特异性检测方法中筛选几种可能性比较大的方法进行验证，将能确切提高cccDNA检测特异性和灵敏度的方法进行优化，作为一种方法的几个步骤组合起来，并用此方法检测肝移植术后不同时期患者的外周血单个核白细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）及慢性乙型肝炎患者的PBMC和肝组织穿刺标本。 本课题分为三个部分：一、HBVcccDNA特异性检测方法的筛选及优化；二、慢性乙型肝炎患者PBMC及肝组织中HBV cccDNA定量检测；三、肝移植患者外周血单个核细胞中HBV检测及临床意义。 一、HBV cccDNA特异性检测方法的筛选及优化 目的 对目前几种cccDNA特异性检测方法进行筛选，选择能更好地提高cccDNA检测特异性的几个方法组合起来，并将此组合的方法进行优化完善。方法 根据文献报道，选择理论上可以提高cccDNA检测特异性的几种方法：十二烷基硫酸钾（potassium dodecyl sulfate，PDS）-蛋白质沉淀核酸抽提法，嵌合引物（chimeric primer）cccDNA特异性检测法，特异性核酸酶切法，跨rcDNA缺口的PCR扩增法和实时荧光PCR法等，以慢性乙型肝炎患者血清、肝组织标本及HBV质粒标准品鉴定、选择最佳的几个方法，作为分步骤组合为一个新的方法，再对每个步骤进行优化，提高检测方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果抽提HBV核酸后，先用不降解质粒的ATP依赖DNA酶(Plasmid-safe
论文目录
相关论文文献
- [1].HBV cccDNA研究现状与挑战[J]. 临床肝胆病杂志 2019(06)
- [2].Regulation Mechanism of HBV cccDNA[J]. Infection International(Electronic Edition) 2012(02)
- [3].乙型肝炎病毒cccDNA与血清巨噬细胞移动抑制因子表达相关性的研究[J]. 中西医结合肝病杂志 2019(02)
- [4].靶向HBV cccDNA的药物及生物技术[J]. 临床肝胆病杂志 2019(06)
- [5].HBV cccDNA检测技术与临床应用[J]. 临床肝胆病杂志 2019(10)
- [6].乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎患儿血清中HBV-cccDNA水平检测及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版) 2018(06)
- [7].肝癌患者血清乙肝病毒e抗原与肝细胞HBV cccDNA水平的相关性[J]. 安徽医学 2018(04)
- [8].乙肝患者肝组织cccDNA与血清HBsAg及肝损伤的关系[J]. 中国现代医学杂志 2014(22)
- [9].乙型肝炎病毒cccDNA临床应用研究新进展[J]. 中华医院感染学杂志 2013(17)
- [10].乙型肝炎病毒cccDNA研究进展[J]. 中国自然医学杂志 2010(03)
- [11].滚环扩增在乙型肝炎病毒cccDNA检测中的应用[J]. 解放军医学杂志 2009(06)
- [12].复方肃毒星提取物抑制乙型肝炎病毒cccDNA的作用[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版) 2020(04)
- [13].乙型肝炎病毒cccDNA体外实验模型研究进展[J]. 科学通报 2019(30)
- [14].Analysis of related factors for intrahepatic HBV cccDNA level in patients with chronic HBV infection[J]. China Medical Abstracts(Internal Medicine) 2013(03)
- [15].HBV cccDNA SYBR Green Ⅰ荧光定量检测方法的建立及初步应用[J]. 现代预防医学 2012(16)
- [16].乙型肝炎cccDNA的检测和临床应用[J]. 河北医药 2012(19)
- [17].乙型肝炎病毒cccDNA临床研究进展[J]. 中国当代医药 2010(17)
- [18].乙型肝炎病毒cccDNA检测与血清学及病理诊断关系[J]. 中国现代医学杂志 2009(22)
- [19].cccDNA的最新研究进展[J]. 临床和实验医学杂志 2008(07)
- [20].HBV cccDNA的体外细胞模型和实验小鼠模型[J]. 临床肝胆病杂志 2019(06)
- [21].HBV cccDNA定量检测方法的研究进展[J]. 临床肝胆病杂志 2019(06)
- [22].乙肝病毒cccDNA检测方法研究进展以及临床意义[J]. 继续医学教育 2016(07)
- [23].乙肝病毒cccDNA检测方法及临床意义的研究进展[J]. 生物医学工程学杂志 2009(03)
- [24].Relationship between Maternal PBMC HBV cccDNA and HBV Serological Markers and its Effect on HBV Intrauterine Transmission[J]. Biomedical and Environmental Sciences 2019(05)
- [25].慢性乙肝患者血清cccDNA临床相亲性研究[J]. 国际检验医学杂志 2009(10)
- [26].HBVc ccDNA研究新动向[J]. 临床肝胆病杂志 2008(04)
- [27].干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈[J]. 临床肝胆病杂志 2019(06)
- [28].乙型肝炎病毒感染患者血清cccDNA检测及其临床应用[J]. 肝脏 2012(02)
- [29].对乙型肝炎病毒cccDNA的新认识[J]. 西部医学 2011(12)
- [30].乙型肝炎病毒cccDNA检测方法的建立及初步应用[J]. 中国医药导报 2009(06)