枯草芽孢杆菌Tpb55抗菌物质纯化及特性的初步研究

论文摘要

本文通过对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Tpb55抗菌物质的纯化和其特性进行研究,探明枯草芽孢杆菌Tpb55菌株生防作用的机理,为该菌及所产活性物质的开发利用提供依据,也可为我国植物病害生物防治抗性基因发掘、药物的筛选等提供研究基础,主要结果如下:1.筛选出了适合枯草芽孢杆菌Tpb55产生抗菌活性物质的培养液和培养条件即:葡萄糖10.0g、蛋白胨3.0g、MgSO4 0.5g、酵母膏1.5g和牛肉膏1.5g、水1000ml,31℃,初始pH为7.0的条件下,180 r/min振荡培养72h产生的抗菌活性物质最多。2.抗菌谱测定表明,Tpb55产生的抗菌物质对多种植物病原真菌、细菌具有较强的抑制作用。Tpb55分泌的抗菌物质具有较好的热稳定性,60℃温度处理对其抑菌活性基本没有影响,在较大pH范围内（pH5-10）比较稳定,木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶对粗提液抗菌活性几乎没有影响,有机溶剂对Tpb55抗菌活性物质影响不大,且活性物质疏水性较弱,抗菌物质具有蛋白酶活性。Tpb55产生的抗菌物质对Alternaria alternata菌丝的生长和孢子萌发具有很强的抑制作用。使A.alternata的菌丝出现畸形,呈捻珠状,菌丝顶端膨大形成泡囊,有的泡囊囊壁出现断裂,抗菌物质处理A.alternata孢子,能使孢子萌发产生泡囊。3.通过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-75（1.6cm×80cm）凝胶层析对硫酸铵饱和度为90%沉淀下的蛋白质进行纯化,纯化出1种抑菌蛋白,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对纯度及分子量测定,该抑菌蛋白质亚基分子量约为48kb。该抗菌蛋白能抑制A.alternata菌丝的生长和孢子萌发,抑菌活性强于无菌滤液,且处理36h后孢子破碎。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略表
• 第一章 绪论
• 1.1 植物病害生物防治研究进展
• 1.2 生物防治在防治烟草病害中的应用
• 1.3 芽孢杆菌作为生防菌的研究进展
• 1.3.1 芽孢杆菌作为生防菌的应用现状
• 1.3.2 芽孢杆菌生防作用机制的研究
• 1.3.3 溶菌作用
• 1.3.4 诱导植物抗性和促进植物生长
• 1.4 生物技术在芽孢杆菌生防作用中的应用
• 1.4.1 诱变育种
• 1.4.2 筛选抗病基因
• 1.4.3 原生体融合技术
• 1.5 研究的目的和意义
• 1.6 目前存在的问题和展望
• 第二章 培养条件对枯草芽孢杆菌 TPB55 生长及抗菌物质产生的影响
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 抗菌物质对烟草赤星病菌的拮抗作用
• 2.2.2 液体培养基单因素筛选实验
• 2.2.3 正交实验的结果
• 2.2.4 蛋白含量标准曲线
• 2.2.5 枯草芽孢杆菌 Tpb55 生长曲线图
• 2.2.6 枯草芽孢杆菌 Tpb55 发酵过程中pH 的变化
• 2.3 小结与讨论
• 第三章 枯草芽孢杆菌 Tpb55 抑菌物质特性分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 抑菌谱测定
• 3.2.2 Tpb55 抑菌物质生化特性分析
• 3.2.3 枯草芽孢杆菌 Tpb55 抗菌物质对 A.alternata 的抑菌机理
• 3.3 小结与讨论
• 第四章 枯草芽孢杆菌 TPB55 抗菌物质的纯化与抑菌作用
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 硫酸铵分级沉淀结果
• 4.2.2 DEAE Sepharose Fast Flow（2.6×50cm）离子交换层析
• 4.2.3 Sephadex G-75（1.6cm×80cm）凝胶层析
• 4.2.4 纯度及分子量测定
• 4.2.5 抗菌蛋白抑菌机理
• 4.3 小结与讨论
• 第五章 讨论
• 5.1 培养条件对枯草芽孢杆菌 TPB55 生长及抗菌物质产生的影响
• 5.2 枯草芽孢杆菌 TPB55 抗菌物质特性分析
• 5.3 枯草芽孢杆菌 TPB55 抗菌物质的纯化与抑菌作用
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历