白萝卜粗提物作用于Cajal间质细胞促胃肠动力作用的机制

论文摘要

白萝卜（Raphanus sativus L.）又称莱菔,是中草药中具有明确促胃肠动力的单味中药,被广泛用于“食积胀满”、“反胃吐食”的治疗。白萝卜作为药源性食物已经应用久远,但是在其促进胃肠动力方面机制的研究不够完善。白萝卜本身是可食用并无明显毒副作用的中药,如果能够阐述清楚其作用机制,进而从中提取到可以用于临床且作用效果明确的促胃肠动力有效成分,则不仅可以回避促胃肠动力西药的毒副作用,而且还具有重要的临床实用价值和巨大的社会、经济学效益。本课题在既往本实验室实验证实白萝卜粗提物（The crude extract of raphanus,Ecr）促胃肠动力的作用,且确定其最佳作用剂量为1 ml/kg基础上,应用电生理学、免疫组织化学荧光双重标记以及电子显微镜等实验方法,研究Ecr对胃电起搏区Cajal间质细胞（Interstitial cells of cajal,ICCs）的活化作用及与Cajal间质细胞产生的慢波传递作用密切相关的缝隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）和细胞间连接反应变化、小肠消化间期移行性复合肌电（Interdigestive Myoelectric Complex,IMC）及与ICCs相关兴奋性胃肠激素P物质（Subtance P,SP）等变化情况,探讨Ecr促胃肠动力的作用机制。旨在为开发出具有知识产权的促动力中药提供可靠的理论基础。方法:①采用免疫组化荧光双重标记ICCs与SP、ICCs与Cx43的方法,观察Ecr作用对与ICCs密切关系的兴奋性胃肠激素SP及缝隙连接蛋白Cx43的影响;②采用电生理学方法观察Ecr对大鼠小肠IMC周期、活动期与周期的比值及活动期的快波数目的影响;③采用透射电子显微镜的方法观察Ecr作用后ICCs超微结构的特点及ENS神经末梢-ICCs-SMC三者细胞间连接等关系特点。结果:①Ecr能增加肌间神经丛和肌内SP及与ICCs结合的SP的表达,而对黏膜层和黏膜下层SP的表达无明显影响;②Ecr能增加肌间神经丛和肌层Cx43的表达,及与ICCs结合的Cx43的表达;③Ecr能促进小肠IMC活动期的快波节律,缩短IMC周期,及增加活动期占整个周期的比值;④电子显微镜研究也证实ICCs有丰富的线粒体和滑面内质网,ICCs与神经末梢密切联系,与SMC形成缝隙连接。并且发现ICCs与SMC之间一种特殊的细胞间密切连接的方式。结论:Ecr促进胃肠动力的外周机制可能是通过促进ICCs的电活动、促进与ICCs密切相关的兴奋性神经递质SP的表达和促进ICCs与相邻ICCs及SMC之间的缝隙连接蛋白的表达及增强缝隙连接的作用等来实现的。Ecr促动力的外周机制与ICCs密切相关,并且是多因素互相作用、互相影响,共同完成的。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验材料和Ecr 的制备
• 实验一 白萝卜粗提物对Cajal 细胞的作用及其相关因素影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 实验二 白萝卜粗提物对小肠IMC 的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 实验三 白萝卜粗提物影响ICCs 与神经末梢、SMC 相互关系的透射电镜观
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 讨论
• 一、Ecr 对大鼠胃电生理起搏区ICCs 及SP 的影响与意义
• 二、Ecr 对大鼠胃电生理起搏区ICCs 及Cx43 的影响与意义
• 三、Ecr 对大鼠小肠IMC 的影响及机制
• 四、电镜下ICCs 形态特点及缝隙连接的意义
• 进一步研究设想
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢