肉苁蓉对猪体外培养胚胎早期发育影响效果的研究及其机理初步探讨

论文摘要

为探讨肉苁蓉在对猪胚胎体外生长发育的影响效果,本研究以猪胚胎为实验材料,设计三个试验:肉苁蓉水提液对猪胚胎早期发育体外培养效果的的筛选试验;在不同时期添加肉苁蓉水提液对猪胚胎早期体外发育的影响;肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响。以期为提高体外培养胚胎发育率和扩大中医药的应用范围开拓一条新的途径。试验一:以NCSU-23+0.4%BSA基础液为对照组,添加不同浓度肉苁蓉水提液为试验组,初步筛选出四个浓度后再进一步筛选出最佳浓度。试验结果:肉苁蓉水提液的最佳浓度为50μg/ml,其卵裂率和囊胚率分别为85.12±2.9%和31±3.0%,显著高于对照组的76.73±3.2%、24.89±4.3%（P<0.05）,试验各组之间无显著性差异。结果表明:在基础培养液中添加肉苁蓉水提液能有效促进胚胎体外生长发育。试验二:胚胎在不同发育时期所需营养物质不同,为了能明确在胚胎发育的哪个时期加入肉苁蓉水提液效果更好,本试验在胚胎发育的三个时期加入肉苁蓉,比较其在何时期加入效果更好。试验结果:在胚胎培养的2-4cell期添加肉苁蓉水提液,其囊胚率达到48.72±6.6%,高于对照组囊胚率25.08±5.4%,两者之间有极显著差异（P<0.01）。而且,也比在体外成熟阶段（IVM）和胚胎培养（IVC）阶段加入的效果要好,二者之间差异显著（P<0.05）。结果表明:在胚胎培养的2-4cell期添加肉苁蓉能更有效的促进胚胎体外发育的能力。试验三:本试验基于对NO前期研究的基础上,对培养到囊胚阶段的胚胎中NO含量进行了测定,观察添加中药是否对胚胎NO含量产生影响。试验结果:经过体外培养到囊胚阶段,胚胎细胞中NO含量均较高,对照组和试验组分别为26.33±1.90和20.30±0.95。但添加肉苁蓉水提液后其胚胎细胞中NO含量明显降低,与对照组有显著性差异（P<0.05）。结果表明:肉苁蓉的水提液在一定程度上清除了胚胎在体外培养过程中所产生的自由基,优化了NO在细胞信号通路中的双相调节作用,从而减少了NO的生成,提高了胚胎体外发育率。以上结果说明:肉苁蓉水提液对猪胚胎体外生长发育的影响效果显著。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1“肾藏精”理论及现代研究
• 1.1.1 祖国医学对“肾藏精”理论的认识
• 1.1.2“肾藏精”的现代研究
• 1.2 补肾药物现代研究
• 1.3.肉苁蓉药理研究进展
• 1.3.1 温肾壮阳
• 1.3.2 补肾益精
• 1.3.3 润肠通便
• 1.3.4 抗氧化
• 1.3.5 抗小脑颗粒细胞凋亡作用
• 1.3.6 其它作用
• 1.4.猪卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养研究进展
• 1.4.1 卵母细胞的体外成熟培养
• 1.4.1.1 卵巢的运输及保存温度
• 1.4.1.2 卵母细胞
• 1.4.1.3 COCS 的获取方式
• 1.4.1.4 卵丘细胞
• 1.4.1.5 卵泡
• 1.4.1.6 基础培养基及添加成分
• 1.4.1.7 渗透压
• 1.4.1.8 培养时间
• 1.4.1.9 培养气相
• 1.4.2 胚胎培养
• 1.4.2.1 培养液及其组成成分
• 1.4.2.2 添加物质
• 1.4.2.3 培养的气相环境
• 1.4.2.4 培养系统
• 1.4.2.5 培养温度
• 1.5 本研究的目的、意义及主要内容
• 2 正文
• 试验一 肉苁蓉水提液对猪胚胎早期发育体外培养效果的的筛选试验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器
• 1.1.2 主要化学试剂
• 1.1.3 各种溶液配制
• 1.1.4 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 数据分析
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 试验二 在不同时期添加肉苁蓉水提液对猪胚胎早期体外发育的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器
• 1.1.2 主要化学试剂
• 1.1.3 各种溶液配制
• 1.1.4 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 数据处理
• 2.结果
• 3.讨论
• 试验三 肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO 浓度含量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器设备
• 1.1.2 主要化学试剂
• 1.1.3 各种溶液配制
• 1.1.4 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 数据处理
• 2.结果
• 3.讨论
• 3 结论
• 4 问题与展望
• 5 参考文献
• 6 附录
• 致谢
• 个人简历