金线莲提取物对高糖诱导的内皮细胞保护作用及作用机制

论文摘要

目的目前,世界上糖尿病患者正急剧增加,其中糖尿病血管并发症是糖尿病患者致残、致死的主要原因。氧化应激是引起糖尿病血管病变的主要因素。糖尿病患者体内血糖的升高会影响机体正常的生化过程,产生大量的自由基,最终导致各组织氧化应激加强。此氧化应激不仅使组织中各活性物质结构与功能受到损伤,还能引起多种细胞因子释放,激活细胞内的信号通道,进一步引发各种糖尿病并发症。抗氧化剂应用,特别是中药的抗氧化剂应用于糖尿病的治疗受到越来越多人的关注。金线莲,为兰科开唇兰属,是一种多年生的珍贵中草药。民间多用于治疗糖尿病、肿瘤、高血脂、毒蛇咬伤等疾病。本课题通过体外实验,探讨金线莲水提物（金线莲多糖,AFP）与甲醇提物（化合物J-9和kinsenoside）拮抗高糖损伤作用的机制。方法本课题采用体外实验,研究金线莲多糖对羟自由基、超氧阴离子的清除作用以及对小鼠肝匀浆脂质过氧化的保护作用。在体外原代培养HUVECs培养基中,分别加入AFP、J-9、kinsenoside并与高浓度葡萄糖（80mM）孵育72h后,检测细胞中CAT活性及T-AOC,用明胶酶谱法检测细胞外MMP-2、MMP-9的蛋白活性,荧光定量PCR检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2及NF-κB mRNA的表达。结果一金线莲多糖的体外抗氧化作用研究实验结果显示,AFP以剂量依赖的方式清除O-2·及·OH;并抑制小鼠肝组织MDA的生成。二金线莲多糖对高浓度葡萄糖诱导脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用及作用机制AFP对正常HUVECs无毒性作用,不影响细胞的增殖活性。AFP对高糖诱导HUVECs损伤有显著保护作用,并能显著增强高葡萄糖浓度下HUVECs细胞内CAT的活性。AFP能够抑制高糖引起的HUVECs胞外MMP-2与MMP-9蛋白活性增加。降低高糖诱导的HUVECs中MMP-2、MMP-9 mRNA的表达量,并提高MMPs抑制剂TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达量。AFP能够降低核因子NF-κB mRNA表达量。三金线莲甲醇提取物（J-9、kinsenoside）拮抗高浓度葡萄糖诱导内皮细胞损伤的作用机制化合物J-9、kinsenoside能显著增强高葡萄糖浓度下HUVECs细胞内抗氧化酶的活性以及总抗氧化能力。化合物J-9、kinsenoside能够抑制高糖引起的HUVECs胞外MMP-2与MMP-9蛋白活性增加。降低高糖诱导的HUVECs中MMP-2、MMP-9 mRNA的表达量,并提高MMPs抑制剂TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达量,调节MMPs /TIMPs的比例,缓解细胞外基质的过度降解。化合物J-9、kinsenoside能够降低核因子NF-κB mRNA表达量。结论本实验结果表明AFP具有良好的抗氧化功能,根据以往本实验室的研究J-9、kinsenoside也具有良好的抗氧化活性。在糖尿病血管病变过程中,AFP、J-9、kinsenoside都能抑制高血糖引发的氧化应激,平衡细胞外基质的降解与重构机制,阻断细胞信号通道,保护血管细胞免受损伤,而起到治疗糖尿病血管病的作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 绪论
• 1 概述
• 1.1 糖尿病
• 1.2 氧化应激
• 1.3 基质金属蛋白酶与基质金属蛋白酶组织抑制物
• 1.4 NF-κB
• 1.5 金线莲
• 2 本论文研究目的和研究内容
• 3 参考文献
• 第二部分 金线莲多糖的体外抗氧化作用研究
• 1 引言
• 2 实验材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果
• 3.1 AFP 对·OH 的清除作用
• 3.2 AFP 对O-2 的清除作用的清除作用
• 3.3 AFP 对小鼠肝组织匀浆自氧化反应的影响
• 2+-H₂0₂ 诱导的小鼠肝线粒体中MDA 生成的影响'>3.4 AFP 对Fe²⁺-H₂0₂ 诱导的小鼠肝线粒体中MDA 生成的影响
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 第三部分 金线莲多糖对高浓度葡萄糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及作用机制
• 1 引言
• 2 实验材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 3 实验结果
• 3.1 高浓度葡萄糖对HUVECs 细胞增殖活力的影响
• 3.2 AFP 对HUVECs 的毒性检测
• 3.3 AFP 对高糖浓度下HUVECs 细胞增殖活力的影响
• 3.4 AFP 对高糖浓度下HUVECs 细胞内CAT 活力的影响
• 3.5 AFP 对高糖浓度下HUVECs 胞外MMPs 活性的影响
• 3.6 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-2 mRNA 的表达水平的影响
• 3.7 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-9 mRNA 的表达水平的影响
• 3.8 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中TIMP-1 mRNA 的表达水平的影响
• 3.9 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中TIMP-2 mRNA 的表达水平的影响
• 3.10 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-2 /TIMP-2 比值的影响
• 3.11 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-9 /TIMP-1 比值的影响
• 3.12 AFP 对高糖浓度下HUVECs 中NF-κB mRNA 的表达水平的影响
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 第四部分 金线莲甲醇提取物（J-9、kinsenoside）拮抗高浓度葡萄糖诱导内皮细胞损伤的作用机制
• 1 引言
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 试验方法
• 3 实验结果
• 3.1 化合物J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 细胞内CAT 活力的影响
• 3.2 化合物J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 细胞内总抗氧化能力影响
• 3.3 化合物J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 胞外MMPs 活性的影响
• 3.4 J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-2 mRNA 的表达水平的影响
• 3.5 J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-9 mRNA 的表达水平的影响
• 3.6 化合物J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 中TIMP-1 mRNA 的表达水平的影响
• 3.9 化合物J-9 和kinsenoside 对高糖浓度下HUVECs 中MMP-9
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 致谢
• 附录1
• 附录2