大白菜真叶离体再生体系的研究

论文摘要

以西北农林科技大学大白菜课题组提供的‘06J28’、‘92S105’、‘06J31’和‘06J30’四个大白菜品系为实验材料,研究了激素配比,大白菜真叶不同切割和插入方式和硝酸银等对大白菜真叶不定芽再生的影响,并对06J28真叶不定芽再生过程的组织学特征进行观察。取得了以下结果:1、建立了大白菜真叶离体再生体系。即以大白菜刚露出第二片真叶时的大白菜幼苗的第一片真叶为试材,在真叶柄基部和下胚轴交接处横切,保留完整的真叶作为外植体,以真叶柄的下端竖直向下插入到MS + 4.0 mg?L-1 6-BA + 0.14 mg?L-1 NAA培养基上培养,不定芽再生后,转入MS + 4.0 mg?L-1 6-BA + 0.14 mg?L-1 NAA培养基中进行不定芽复壮,随后转入1/2MS + 1.0 mg?L-1 IBA进行生根后移栽。培养条件为温度25±1℃,光照时间16 h/d,光照强度为40 mmol·m-2·s-1。2、在上述再生体系下,供试的4种基因型材料,均能够诱导出不定芽。其中,‘06J28’真叶再生率最高,达到87.63%,再生系数为2.62,生根率为70%;‘92S105’的再生系数最高,为3.76。3、在MS + 0.3 mg?L-1 TDZ + 0.14 mg?L-1 NAA芽诱导培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽再生率和再生系数,分别为80.73%和1.89,说明TDZ作用与6-BA一致,效果略低。4、在MS + 4.0 mg.L-16-BA + 0.14 mg.L-1NAA最适芽诱导培养基上加入不同浓度的硝酸银,低浓度(小于8.0 mg.L-1)对不定芽再生无影响,而高浓度(10.0 mg.L-1)对不定芽再生有抑制作用。5、在分别以MS和MS粉为基本培养基中加入4.0 mg.L-16-BA和0.28 mg.L-1NAA作为芽诱导培养基时,对大白菜真叶不定芽再生率和再生系数没有显著性差异,均能满足实验要求。6、组织学观察表明,‘06J28’真叶不定芽的再生是由真叶叶柄切口处维管束周围的皮层薄壁细胞分裂,形成大量的分生细胞团,进而在切口端的中间部位形成愈伤组织,愈伤组织表面进一步旺盛分裂,形成芽原基和叶原基,进而不断生长发育形成不定芽。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 大白菜组织培养研究进展
• 1.2.1 大白菜离体培养的途径
• 1.2.1.1 愈伤组织途径
• 1.2.1.2 器官发生途径
• 1.2.2 影响大白菜组织培养的因素
• 1.2.2.1 外植体方面的因素
• 1.2.2.2 实验操作方面的因素
• 1.2.2.3 诱导条件和培养条件方面的因素
• 1.2.2.4 不定芽生根
• 1.2.2.5 大白菜离体培养中存在的主要问题
• 1.3 大白菜不定芽再生组织学观察研究进展
• 1.4 本研究目的与意义、研究内容与技术路线
• 1.4.1 本研究目的与意义
• 1.4.2 研究内容
• 1.4.3 本研究的技术路线
• 1.4.3.1 真叶再生体系的建立
• 1.4.3.2 真叶不定芽再生观察
• 第二章 大白菜真叶离体高频再生体系的建立
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 无菌苗培养
• 2.1.2.2 外植体获得
• 2.1.2.3 6-BA、TDZ 与NAA 组合对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.1.2.4 外植体的切割与培养方式对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.1.2.5 不同基因型对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 3 对大白菜真叶不定芽再生的影响'>2.1.2.6 AgNO₃对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.1.2.7 基本培养基对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.1.2.8 不定芽复壮
• 2.1.2.9 不定芽生根与植株移栽
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 6-BA、TDZ 与NAA 组合对真叶不定芽再生的影响
• 2.2.2 外植体的切割及插入方式对真叶不定芽再生的影响
• 2.2.3 不同基因型对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 3 对大白菜真叶不定芽再生的影响'>2.2.4 AgNO₃对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.2.5 基本培养基对大白菜真叶不定芽再生的影响
• 2.2.6 生根培养基的筛选和幼苗移栽
• 2.3 讨论
• 第三章 大白菜离体真叶不定芽再生的组织学特征
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 供试材料
• 3.1.2 无菌材料的获得
• 3.1.2.1 无菌苗培养
• 3.1.2.2 外植体获得
• 3.1.2.3 不定芽诱导
• 3.1.3 方法
• 3.1.3.1 形态学观察
• 3.1.3.2 石蜡切片
• 3.1.3.3 半薄切片观察
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 培养过程中真叶外植体的形态学变化
• 3.2.2 培养过程中真叶外植体的组织学变化
• 3.2.2.1 真叶外植体的结构
• 3.2.2.2 切口处细胞的启动和分裂
• 3.2.2.3 分生细胞团、芽原基的形成
• 3.2.2.4 真叶不定芽的产生
• 3.3 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附录
• 缩略语表词
• 致谢
• 作者简介