蜂蜜中四环素类抗生素的残留检测方法及降解规律研究

论文摘要

在养蜂生产过程中，四环素类抗生素（TCs）通常被用来治疗或预防蜜蜂美洲幼虫腐臭病或欧洲幼虫腐臭病，但同时也造成了蜂产品中TCs残留。在蜂蜜的加工储存过程中，在合适的温度、酸度、水环境下，TCs会发生较大程度的差向异构化，生成差向异构体（ETCs），ETCs毒性甚至比药物原形更强。因此，有必要对蜂产品中TCs及其降解产物ETCs的进行监测，防止TCs对人体可能造成的伤害。尽管已经有许多测定TCs的方法，但这些方法都是针对母体的残留分析。本研究采用液相色谱-质谱联用技术，建立了同时测定蜂蜜样品中4种TCs和3种ETCs的方法，即四环素（TC）、强力霉素（DC）、土霉素（OTC）、金霉素（CTC），差向四环素（ETC）、差向土霉素（EOTC）、差向金霉素（ECTC）。蜂蜜样品中残留的药物用EDTA-McIlvaine缓冲液提取，提取液依次经OASISHLB及羧酸弱阳离子柱固相萃取柱富集、净化、洗脱。洗脱液微孔滤膜过滤后，通过流动相甲酸水+乙腈梯度分离，电喷雾-串联质谱进行测定。在多反应监测模式下，22min内7种药物（TC、OTC、CTC、DC、ETC、ECTC、EOTC）全部分离并进行定性定量。样品在50μg/kg-200μg/kg添加范围内，回收率在64.9%-91.0%之间，相对标准偏差（RSD）不大于9.7%。OTC、EOTC、TC及ETC的检测限为1μg/kg，CTC及ECTC、DC的检测限为2μg/kg。本方法灵敏、可靠，可用于蜂蜜中七种药物残留的同时检测（TC、OTC、CTC、DC、ETC、ECTC、EOTC）。为了探求蜂蜜贮存和加工过程中其残留TCs的代谢规律，采用上述已建立的方法，考察蜂蜜中影响TCs水解代谢规律的主要因素，模拟蜂蜜的不同的加工存储条件获得不同残留量样本，批量分析后，经统计建立降解模型。得出以下结果：（1）TCs及ETCs均不稳定，光照条件下易降解。而避光保存时，蜂蜜中残留TCs的主要降解途径为水解，水解产物为ETCs，其主要影响因素为环境温度（加工、储存），时间（加工、储存），初始浓度。蜂蜜品种、包装密封性影响不明显。（2）依据因子设计法获得不同加工条件下的TCs残留数据，建立完全二次水解动力学模型。（3）依据回归正交组合设计法获得不同存储条件下的TCs残留数据，建立完全二次水解动力学模型。通过研究TCs残留蜂蜜在加工、贮存过程中的降解规律，阐明了加工存储温度、时间、初始浓度与TCs及ETCs残留关系，对蜂蜜的生产加工管理，养蜂生产中药物的合理使用具有重要的意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 蜂蜜简述
• 1.1 主要成分及功能
• 1.2 生产、消费与出口现状
• 2 抗生素及抗生素的体外代谢降解
• 2.1 水解
• 2.2 光解
• 2.3 微生物降解
• 2.4 植物降解
• 2.5 微电解
• 3 TCs药物研究进展
• 3.1 TCs基本结构
• 3.2 TCs发展及构效关系
• 3.3 TCs的化学性质
• 3.3.1 差向异构化反应
• 3.3.2 脱水
• 3.3.3 内酯异构化
• 3.3.4 与金属离子的螯合反应
• 3.4 TCs/ETCs的毒副作用
• 3.5 TCs/ETCs消解残留规律的研究进展
• 3.6 TCs/ETCs残留检测技术
• 3.6.1 微生物法
• 3.6.2 薄层色谱法
• 3.6.3 高效液相色谱法
• 3.6.4 毛细管电泳法
• 3.6.5 免疫分析法
• 3.6.6 液质联用技术
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 仪器与器材
• 1.3 试剂与药品
• 1.4 蜂蜜中TCs残留检测方法
• 1.4.1 样品前处理
• 1.4.2 样品分析条件
• 1.5 TCs残留蜂蜜降解规律研究方法
• 1.5.1 预试验
• 1.5.2 加工模拟试验
• 1.5.3 储存模拟试验
• 1.5.4 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 蜂蜜中TCs残留检测方法的建立
• 2.1.1 定性定量分析
• 2.1.2 标准曲线
• 2.1.3 检测限与定量限
• 2.1.4 回收率试验
• 2.1.5 实际样品的测定
• 2.2 TCs残留蜂蜜降解规律研究
• 2.2.1 解释变量的选择
• 2.2.2 加工条件下降解结果与分析
• 2.2.2.1 直接分析
• 2.2.2.2 建模分析
• 2.2.2.3 交互作用分析
• 2.2.2.4 边际效应
• 2.2.2.5 模型的部分验证
• 2.2.3 储存条件下降解结果与分析
• 2.2.3.1 建模分析
• 2.2.3.2 交互作用分析
• 2.2.3.3 单因素分析
• 2.2.3.4 边际效应
• 2.2.3.5 模型的部分验证
• 3 讨论
• 3.1 蜂蜜中TCs残留检测方法
• 3.1.1 提取与净化方法
• 3.1.2 TCs药物的液相质谱条件
• 3.1.3 方法适用性
• 3.2 TCs残留蜂蜜降解规律研究
• 3.2.1 解释变量的选择
• 3.2.2 模型的建立
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A：标样及空白添加样的TIC/EIC离子流色谱图
• 附录B: 加工模拟试验TCs/ETCs残留数据
• 附录C: 统计图
• 作者简历
• 成果清单