论文题目: 细菌内毒素国家标准品原料提取方法、特性分析及标准品制备工艺的初步研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 药物分析学
作者: 于婷
导师: 李波,高华
关键词: 细菌内毒素标准品,内毒素,细菌内毒素国家标准品,细菌内毒素检查法
文献来源: 中国药品生物制品检定所
发表年度: 2005
论文摘要: GMP生产条件下的制药过程中存在的热原通常是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖(即内毒素，Endotoxin)，目前广泛应用细菌内毒素检查法(Bacterical EndotoxinTest，BET)检测药品中的细菌内毒素含量。其原理是通过鲎试剂与细菌内毒素产生的凝聚反应，判断药品中细菌内毒素的限量是否符合规定。细菌内毒素检查法作为药品质量控制的重要检测项目之一，在保障临床用药安全方面起到了非常重要的作用。细菌内毒素检查法是建立在标准化的基础之上，故其结果准确度高、重复性好、具有可比性。细菌内毒素检查法的标准化包括众多因素，其重要因素之一就是细菌内毒素标准品。细菌内毒素标准品的引入和建立，在很大程度上促进了该方法的标准化和规范化，并使该方法在世界范围内得以协调和统一。 尽管大部分国家的细菌内毒素标准品都是采用热酚水法从大肠杆菌中提取所得，但因纯化方法的不同使得到的内毒素在组分、理化特性以及生物学活性等方面都存在着一定差异。目前我国使用的细菌内毒素国家标准品(批号981)的原料是由上海生物制品研究所于1997年制备的，虽然在生物学活性上满足了作为标准物质的要求，但在制备之初仅对其生物学活性进行了分析，没有理化性质分析数据，无法与国际标准品和其它国家的标准品相比对，并且使用近八年，库存量日渐减少，也需要尽快制备新一批的国家标准品。 因此本研究的主要目的就是研究细菌内毒素国家标准品原料的提取方法、理化性质和生物学活性分析方法，以期早日制备出新一批细菌内毒素国家标准品。 首先，确定了细菌内毒素国家标准品原料的提取方法。根据相关文献和资料，采用四种方法(分别简称为中国、美国、日本和浙江方法)从大肠杆菌O111：B4中提取内毒素，通过生物学活性(致凝活性、家兔致热活性等)和杂质含量(蛋白、核酸)的比较分析，表明日本方法制备的内毒素原料生物学活性高、杂质含量低。故选择该方法进行了一系列条件的优化实验，从而确定了最佳提取方法即：复苏、培养和收获大肠杆菌，超声破碎处理菌液，热酚水法粗提后，105000×g超速离心4h，最后进行电透析得到纯化内毒素，冻干保存。 然后，应用该提取方法制备了三批细菌内毒素国家标准品原料的候选品，通过理化分析：固体含量、蛋白质、核酸、氨基己糖、KDO、磷、单糖及脂肪酸；
论文目录:
一、缩略语索引
二、中文摘要
三、英文摘要
四、前言
五、细菌内毒素国家标准品原料提取方法的研究
1、材料与方法
2、实验结果
3、讨论
4、小结
六、细菌内毒素国家标准品原料的制备以及理化性质和生物学活性的研究
1、材料与方法
2、实验结果
3、讨论
4、小结
七、细菌内毒素国家标准品的制备工艺研究和效价标定
1、材料与方法
2、实验结果
3、讨论
4、小结
八、参考文献
九、综述
十、致谢
发布时间: 2007-03-20
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标签：细菌内毒素标准品论文; 内毒素论文; 细菌内毒素国家标准品论文; 细菌内毒素检查法论文;