槲皮素对膀胱癌细胞的体外作用机制研究

论文摘要

目的 研究植物化学药物槲皮素对膀胱癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导效应,同时探讨槲皮素抗膀胱癌的作用机制。 方法 选取三种不同的膀胱癌细胞株EJ、T24、J82作为研究对象,不同浓度的槲皮素0、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L分别作用于三种细胞,经过24h和48h后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定槲皮素对膀胱癌细胞的增殖抑制作用。同时选EJ细胞测定生长曲线和进行克隆形成实验,进一步证实槲皮素对膀胱癌细胞的活力抑制效应。采用流式细胞术（FCM）检测100μmol几槲皮素作用EJ、T24和J82细胞24h后对细胞周期的影响。用Hoechst33258和TUNEL凋亡检测试剂盒分别检测槲皮素作用于EJ细胞24和48h后的凋亡诱导效应,并通过细胞免疫组织化学方法检测100μmol/L槲皮素分别作用三种细胞24h后,P53、survivin、PTEN蛋白的表达水平变化。同时应用甲基特异性聚合酶链反应（MSP-PCR）检测槲皮素作用T24细胞72h后对三种抑癌基因P16、Erb和PASSF1A的甲基化程度的影响。 结果 （1）MTT试验证实槲皮素对膀胱癌细胞的增殖抑制效应具有浓度和时间依赖关系,与未加药组相比,各浓度组的增殖抑制率有统计学意义上的显著差别（P<0.05）。同时发现,不同浓度组之间的增殖抑制率也有统计学意义上显著差别（P<0.05）。作用48h与24h相比,同等浓度之间增殖抑制率也存在统计学意义上的显著差别（P<0.05）。100μmol/L槲皮素作用48h后,对EJ、T24和J82细胞的增殖抑制率可分别达到50.2%、55.6%及48.7%。（2）平板克隆形成实验显示,不同浓度槲皮素作用EJ细胞24h后,用完全培养基培养14d,各作用浓度克隆形成率比较有显著差异（P<0.05）,而100μmol/L槲皮素作用EJ细胞后,克隆形成率仅0.9%。（3）生长曲线显示,0μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L槲皮素作用于EJ细胞7天后,不同浓度组

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