固本健脑法对MCI大鼠学习记忆功能及海马Aβ表达的影响

论文摘要

老年性痴呆,即阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,是一种以记忆和认知损害为主要临床特征的慢性进行性神经系统退行性疾病。AD目前尚无真正有效的治疗方法,尤其是中晚期AD,其脑功能损害已进入不可逆的阶段,故而治疗效果明显不佳。轻度认知障碍（Mild cognitive impairment,MCI）是目前公认的前痴呆状态（尤其意味着前阿尔茨海默病状态）,对其进行深入研究可望提供最佳治疗时间窗,预防或推迟AD的发生。β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）在AD发病机制中的核心作用已经得到广泛接受, Aβ异常释放与沉积是AD老年斑形成的始动因子和老年斑核中的重要成分,在AD的神经细胞损伤级联反应中,淀粉样沉淀等典型病理生理学改变出现于tau蛋白异常磷酸化之前;Aβ代谢异常是MCI向AD转化的可靠生物学指标之一。脂代谢异常会导致脑动脉硬化,从而改变脑微环境、降低脑血流、使脑代谢受损,致使老年认知功能减退;血清胆固醇升高是MCI的重要危险因素,已有发现高胆固醇血症引起脑中Aβ沉积的证据。Aβ的聚集可以经补体途径产生炎症反应,研究提示,中枢炎症是AD病理变化的早期特征;严格回归分析发现血浆中白介素-6（IL-6）水平升高同认知功能损害有密切的关系,是导致认知障碍的危险因素。因此,减少脑内Aβ的生成和集聚,降低血脂水平以改善脑微环境、增加脑血流、保持脑代谢正常,降低血浆中IL-6水平、阻断Aβ的炎症级联效应等治疗措施,在MCI的早期干预治疗中应具有尤其重要的意义。导师袁德培教授等根据多年临床经验提出以固本健脑立法论治MCI,并依此创制了固本健脑液及相应加减方,临床应用证明确有佳效,能显著改善学习记忆能力和中医辨证之衰老见证积分值,且无任何毒副作用;前期的实验研究也证实,固本健脑液能平和降低老年大鼠血粘度、提高老龄鼠红细胞SOD活力,有提高细胞免疫功能和对抗脾脏、胸腺萎缩的作用;固本健脑方可明显提高实验动物脑中去甲肾上腺素（NA）和多巴胺（DA）的含量,并显著抑制脑内单胺氧化酶（MAO）和乙酰胆碱酯酶（AchE）活力,促进实验动物学习记忆能力。目的:以固本健脑法的前期研究为基础,建立符合MCI行为学、病理学特征的实验性动物模型,更深入的揭示固本健脑法增强学习记忆能力的机制,为本法在临床更好地化裁应用提供更丰富的依据。方法:①采用系统回顾性的文献研究方法,分析探讨以固本健脑立法论治MCI的理论基础。②以腹腔注射D-半乳糖和NaNO2的方法建立MCI大鼠模型,予固本健脑液（高、中、低剂量）于模型动物,并设立正常对照组、吡拉西坦（脑复康）对照组比较观察,观察固本健脑液对MCI模型大鼠行为学（水迷宫实验）、海马结构Aβ表达（免疫组化染色法）、血清胆固醇水平（常规酶法等）、血清IL-6含量（ELISA法）的影响。结果:①记忆能力减退的病变广泛涉及五脏、六腑、奇恒之府、气血津液精、经络等各个环节,但其中最为关键的是脾肾的亏虚。②行为学变化:模型大鼠出现明显的记忆功能障碍,水迷宫实验中其逃避潜伏期、搜索路径长度和跨过平台相同次数所需时间均较正常对照组明显延长（P<0.05）,固本健脑液（高、中、低剂量）和吡拉西坦治疗均能使上述指标明显改善（P<0.05）,且以固本健脑液高、中剂量组效果更为显著（P<0.05）。③Aβ免疫组化染色结果:模型组海马区Aβ表达较正常组明显增多,各个治疗组均能减少Aβ在海马区的表达,但固本健脑液低剂量组和吡拉西坦组效果相对不突出。④血清胆固醇水平和血清IL-6含量变化:模型组血清胆固醇水平和血清IL-6含量升高,明显高于正常组（P<0.05）,固本健脑液各剂量组都能降低血脂水平和血清中IL-6水平,且以高、中剂量组效果更佳;吡拉西坦组可有效降低血清胆固醇水平（P<0.05）,但降低血清中IL-6水平的效果不佳。结论:以上结果提示:按照固本健脑法组方（本课题使用固本健脑液）,能显著改善MCI模型大鼠学习记忆功能,可减少实验动物脑内Aβ的生成和聚集、降低血脂水平和血清中IL-6水平、改善脑微环境,从而可以有效防止MCI向AD的转化。以方（法）测证,说明导师袁德培教授等关于脾肾（后、先天之本）亏虚、脑髓失养、兼夹痰瘀导致认知障碍的认识是合理的,依此提出的固本健脑法是MCI的有效治则。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 理论探讨
• 1 中医学关于记忆生理病理及防治健忘的认识
• 1.1 记忆生理的中医认识
• 1.2 健忘的病机及其防治研究
• 1.3 中医学对轻度认知障碍的认识
• 1.4 小结
• 2 固本健脑法立法及固本健脑液处方的理论依据
• 2.1 理论基础
• 2.2 方药分析
• 实验研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学分析
• 2 实验结果
• 2.1 固本健脑法对MCI模型大鼠行为学的影响
• 2.2 固本健脑法对MCI模型大鼠海马结构Aβ表达的影响
• 2.3 固本健脑法对MCI模型大鼠血清胆固醇水平的影响
• 2.4 固本健脑法对MCI模型大鼠血清IL-6 含量的影响
• 3 讨论
• 3.1 动物模型评价
• 3.2 健忘病机与脾肾的密切关系
• 3.3 固本健脑法改善记忆作用的机制
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 致谢