论文摘要
从河北省不同地区的发病鸡群中，分离到12株具有血凝性的病毒，经血凝试验及和多种阳性血清的血凝抑制试验，确定12个分离株均为新城疫病毒，分别命名为EBB、HBBa、HBC、HBCh、HBH、HBHa、HBL、HBQ、HBS、HBT、HBX和HBZ。对各毒株进行了毒力鉴定和生物学特性的研究，结果表明：12个NDV地方分离毒株均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制活性，对鸡胚的致病作用可被新城疫标准阳性血清所抑制。通过最小致死量致死鸡胚平均死亡时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）的测定证实：12个NDV分离株中除HBC和HBQ为弱毒株外，其余10株均为强毒株。利用RT-PCR技术，对12个NDV分离毒株的F基因主要功能区片段进行了扩增，经鉴定、回收纯化后，克隆到PBS-T载体上，经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性重组子，进行核苷酸序列测定及遗传变异分析。将所测得的各分离株F基因序列与GeneBank中国内外已发表的NDV不同基因型代表株的F基因389bp（1bp～389bp）长度的核苷酸片段及其相应的氨基酸序列（1aa～130aa）进行比较，构建系统发育进化树，并确定了各分离毒株的毒力强弱及其所属的基因型。通过遗传进化分析表明，所有毒株在该区段没有碱基缺失和插入，但有多处点突变，分散存在。12个NDV分离株F基因核苷酸序列同源性为81.2％～99.7％，氨基酸序列同源性为77.5％～100％，12个NDV分离株F基因核苷酸序列与国内外已发表毒株的相应序列同源性为80.5％～98.5％，所推导氨基酸序列同源性为77.5％～97.7％。依据核苷酸及其推导的氨基酸同源性的不同可将其分为明显的三群，群内各毒株的同源性较高，而群间差异则较大，其中第一群包括7株（HBB、HBBa、HBHa、HBL、HBS、HBT和HBX），属于典型的基因Ⅶ型强毒株，分布于进化树的基因Ⅶ型区；第二群包括3株（HBCh、HBH和HBZ），属于传统的基因Ⅵ型强毒株，分布于进化树的基因Ⅵ型区；第三群包括2株（HBC和HBQ），属于古典基因Ⅱ型毒株，分布于进化树的基因Ⅱ型区。研究表明河北省目前新城疫的流行情况比较复杂，流行的NDV以基因Ⅶ型最为普遍，同时兼有传统的基因Ⅵ型和古老的基因Ⅱ型。本研究旨在从分子水平分析河北省NDV的流行趋势，从而为新城疫的防制提供科学依据。