叶下珠提取物对日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化的影响

论文摘要

目的：探讨中药叶下珠提取物对阻止血吸虫虫卵肉芽肿和肝纤维化形成的分子机制。方法：将21只健康的成年雄性Balb/c小鼠随机分为治疗组、模型组、正常组,每组7只。用血吸虫尾蚴经小鼠腹部皮肤同时感染治疗组和模型组小鼠,造成小鼠血吸虫病的动物模型。6周后,血吸虫感染慢性化,开始给药。对治疗组和模型组小鼠采用吡喹酮两日疗法进行杀虫治疗,剂量为500mg/kg·d,溶于生理盐水后灌胃。正常组给予等量生理盐水。杀虫治疗后治疗组给予叶下珠提取物生理盐水溶液灌胃（100mg/kg·d）,同时模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃,1次/日,总共30d。给药结束后处死全部小鼠,将一部分肝组织固定于4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液,一部分冻存于液氮罐中。取脾,分离脾细胞,供RNA提取。通过肝组织切片HE染色,比较各组虫卵肉芽肿大小,通用Masson染色法,对各组肝组织做纤维化评分。碱水解法测定肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline, Hyp）含量,ELISA法测定肝组织匀浆液中白细胞介素13 （interleukin 13,IL-13）的含量。逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）法检测各组脾细胞中GATA3 mRNA表达水平。实时定量逆转录聚合酶链式反应（q-RT-PCR）法检测各组肝组织中精氨酸酶1 （arginine 1, Argl） mRNA表达水平。结果：1.光镜下肝脏病理形态学改变：肝组织切片HE染色可见正常组小鼠肝小叶结构完整,肝细胞排列规则,无虫卵肉芽肿、肝细胞损害及炎性细胞浸润。模型组可见虫卵肉芽肿和严重的肝细胞损害,肝细胞呈空泡样改变,肉芽肿周围有明显的炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织聚集。治疗组肉芽肿范围较小,肝细胞损害和炎性细胞浸润都较模型组减轻,纤维结缔组织明显减少。Masson染色,正常组仅在血管壁和胆管璧有少许胶原分布。模型组可见胶原围绕肉芽肿分布,汇管区纤维组织增多,部分肝组织可见小叶间纤维化形成。治疗组可见胶原局限于肉芽肿内,周边少有分布,纤维化程度较模型组明显减轻。2.肝组织Hyp含量变化：与正常组比较,模型组小鼠肝组织Hyp含量显著升高（P<0.01）,治疗组肝组织Hyp含量较模型组显著降低（P<0.05）。3.肝组织IL-13检测：与正常组比较,模型组小鼠肝组织IL-13水平显著升高（P<0.01）,治疗组肝组织IL-13水平较模型组显著降低（P<0.05）。4.脾细胞GATA3 mRNA检测：模型组表达水平显著高于正常组,治疗组表达水平较模型组显著降低。5.肝组织Argl mRNA检测：模型组表达水平与正常组比较显著降低（P<0.01）,治疗组表达水平较模型组显著降低（P<0.05）。结论：叶下珠提取物可减少促纤维化型细胞因子IL-13的分泌,下调脾细胞GATA3 mRNA及肝组织Argl mRNA的转录水平,抑制血吸虫病肝纤维化的形成与进展。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 前言
• 1. 材料
• 1.1 药物与钉螺
• 1.2 实验动物
• 1.3 试剂
• 1.4 仪器
• 2. 方法
• 2.1 模型制备
• 2.2 动物分组及给药
• 2.3 肝组织病理学检测
• 2.4 肝组织Hyp含量测定
• 2.5 肝组织IL-13含量测定
• 2.6 脾细胞分离、RNA提取及RT-PCR
• 2.7 肝组织RNA提取与q-RT-PCR
• 2.8 统计学方法
• 3. 结果
• 3.1 叶下珠提取物对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织病理学的影响
• 3.2 叶下珠提取物对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织Hyp含量的影响
• 3.3 叶下珠提取物对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织IL-13表达水平的影响
• 3.4 叶下珠提取物对血吸虫感染小鼠脾细胞GATA3转录水平的影响
• 3.5 叶下珠提取物对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织Arg1转录水平的影响
• 讨论
• 1. 叶下珠提取物治疗血吸虫虫卵所致肝纤维化的中医理论依据
• 2. 叶下珠及其有效成分的药理作用
• 3. 给药剂量
• 4. 叶下珠提取物对日本血吸虫感染所致的小鼠肝纤维化具有保护作用
• 4.1 叶下珠提取物能减轻血吸虫感染小鼠肝脏病理改变,降低肝组织中Hyp含量
• 4.2 叶下珠提取物能下调血吸虫感染小鼠脾细胞中GATA3 mRNA水平
• 4.3 叶下珠提取物能减少血吸虫感染小鼠肝组织IL-13含量
• 4.4 叶下珠提取物能下调血吸虫感染小鼠肝组织中Arg1 mRNA水平
• 结语
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢