牛初乳中免疫球蛋白的提取及其保护剂研究

论文摘要

免疫球蛋白是牛初乳中最引人注目的免疫因子,主要应用于提高人体的免疫力,增强对各种疾病的抵抗力。本试验对免疫球蛋白的分离提纯、冷冻干燥、免疫球蛋白在不同条件下的稳定性及加入保护剂对其稳定性改善效果进行了研究。以牛初乳（48h内）为原料,IgG为目标蛋白,对建立一套提纯免疫球蛋白的工艺进行研究。牛初乳在3500r/min下离心20min后脱脂,62℃杀菌30min,调脱脂初乳pH为4.6在4000r/min下离心15min去酪蛋白,乳清液经阴离子交换树脂过柱纯化。洗脱液通过核酸蛋白测定仪在280nm下测吸光度值,收集洗脱峰时的洗脱液经SDS-PAGE电泳法鉴定各洗脱峰的蛋白质组成,收集第三个洗脱峰的洗脱液冷冻干燥,经正交试验筛选真空冷冻干燥参数为:预冻温度-20℃,预冻时间2h,装料厚度8cm,保护剂为4%甘氨酸+4%蔗糖,冻干后得到免疫球蛋白IgG的免疫活性为94%。收集的峰液冷冻干燥后得其IgG的提取率为14.6mg/ml,纯度达70.3%。溶液酸度与受热程度对免疫球蛋白活性影响都很大,本试验研究了IgG在pH值为0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0时的稳定性以及在60℃,62℃,65℃,70℃,75℃,85℃的稳定性,结果表明:随pH值的降低免疫球蛋白的稳定性急剧下降,免疫球蛋白尤其对过酸极不稳定。免疫球蛋白对热敏感,在低温时较稳定,85℃时水浴五分钟免疫球蛋白就会完全失活。通过人工消化试验得出影响免疫球蛋白在人工胃液、人工肠液中稳定性的因素大小为:pH值对免疫球蛋白活性的影响最大,消化时间影响次之,蛋白酶与IgG浓度影响最小。溶液中加入保护剂对免疫球蛋白的活性有明显的保护作用,本试验研究了在三种保护剂浓度分别为5%,10%,15%,pH值为2.0,3.0,4.0时免疫球蛋白活性保留率。结果表明:随着保护剂浓度的升高,保护效果越明显,IgG保存率就越高,三种保护剂的保护效果,甘氨酸)蔗糖)山梨醇。由三因子二次通用旋转设计试验得出,三种保护剂复配使用时,同样浓度的保护剂添加量对免疫球蛋白的保护效果明显优于单一保护剂,考虑到它们之间有协同增效作用,根据成人最佳摄入量与复合保护剂的保护效果设计试验,在pH=2免疫球蛋白提取物浓度为2%时,IgG免疫活性复合保护剂的理想配方为:甘氨酸添加量为4%,山梨醇添加量为3.5%,蔗糖添加量为3.5%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 牛初乳的国内外研究进展
• 1.1.1 牛初乳的营养成分
• 1.1.2 牛初乳生理功能
• 1.1.3 牛初乳中的生物活性物质
• 1.2 免疫球蛋白的提取及真空干燥技术国内外研究现状
• 1.2.1 免疫球蛋白的提取研究现状
• 1.2.2 真空干燥技术研究现状
• 1.3 免疫球蛋白稳定性改善的国内外研究现状
• 1.3.1 免疫球蛋白的热稳定性
• 1.3.2 免疫球蛋白的酸碱稳定性
• 1.3.3 免疫球蛋白在胃肠道蛋白酶作用下的稳定性
• 1.3.4 保护剂对免疫球蛋白的稳定性改善研究
• 1.4 研究目的及意义
• 1.5 研究方法
• 2 免疫球蛋白的提取及真空干燥技术研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 试验试剂
• 2.1.3 试验设备
• 2.1.4 试验方法
• 2.1.5 测定指标及方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 抗血清效价及工作浓度的确定
• 2.2.2 杀菌温度的确定
• 2.2.3 免疫球蛋白的提纯
• 2.2.4 IgG产率及纯度
• 2.2.5 洗脱液真空冷冻干燥最佳工艺条件研究
• 2.3 本章小结
• 3 免疫球蛋白的稳定性研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验试剂
• 3.1.3 试验设备
• 3.1.4 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同pH值环境对牛初乳IgG的稳定性的影响
• 3.2.2 不同加热温度对牛初乳IgG的稳定性的影响
• 3.2.3 人工胃肠液对牛初乳IgG的稳定性的影响
• 3.3 本章小结
• 4 提高免疫球蛋白稳定性的保护剂研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 试验试剂
• 4.1.3 试验设备
• 4.1.4 实验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 单一保护剂对免疫球蛋白的保护作用
• 4.2.2 复合保护剂对免疫球蛋白的保护作用
• 4.3 本章小结
• 5 讨论
• 5.1 免疫球蛋白的提取技术
• 5.2 免疫球蛋白的真空干燥技术
• 5.3 免疫球蛋白稳定性研究
• 5.4 提高稳定性的保护剂研究
• 6 有待解决的问题
• 7 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简介
• 致谢
• 附录