论文题目: 低压组合层析从草药蛇足石杉中同时分离纯化石杉碱甲和石杉碱乙的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化工
作者: 李秀男
导师: 马润宇,苏志国
关键词: 蛇足石杉,石杉碱甲,石杉碱乙,低压组合液相层析,分离纯化
文献来源: 北京化工大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文以低压层析提纯植物天然产物为目的，通过选择层析介质实现低压条件下的制备层析操作，再利用不同层析步骤间的优化组合达到高纯度、高回收率的分离提纯效果。研究内容涉及草药蛇足石杉中两个目标产物石杉碱甲和石杉碱乙的同时分离纯化，通过浸提及三步低压层析的过程优化组合，实现了两者的简捷、高效提纯。 论文首先选择了专一性好的腈基HPLC柱(Inertsil CN-3)，结合固相萃取，建立了适合的目标产物的快速、准确、重现性好的HPLC分析检测方法，作为在分离过程的跟踪检测目标产物的手段。 研究了蛇足石杉的浸提条件，发展了简单有效的浸提方法，即用1％硫酸室温浸泡两次，每次一天，固液比分别是1：10和1：5(w／v)。浸出液中石杉碱甲和石杉碱乙的平均回收率分别为95.2％和96.8％。 研究了大孔吸附树脂层析取代多步的液液萃取操作进行浸出液的富集浓缩过程，筛选了一系列树脂，确定了CBJ-23作为初分离的介质。优化了CBJ-23大孔吸附树脂层析的条件，使石杉碱甲和石杉碱乙的含量分别从0.188％和0.079％提高到了1.72％和0.734％，纯化倍数均＞9；最后产物的回收率分别达到了92.3％和93.1％。 从大孔吸附树脂层析初分离得到的粗品出发，参照文献研究了硅胶正相层析的分离纯化效果，表明由于分辨率低，且存在产物的不可逆吸附，石杉碱甲的回收率和纯度都很低，而石杉碱乙得不到有效回收。 探索了反相层析分离纯化粗品中石杉碱甲和石杉碱乙的工艺。首先以通用型的C18键合硅胶介质YWG C18探索了反相层析对粗品分离纯化效果，结果表明石杉碱甲和石杉碱乙在C18硅胶上可以得到部分分离，但分离度较低，因此产物的纯度和回收率均不理想；用新型的PST介质代替传统的C18键合硅胶介质反相
论文目录:
第一章 文献综述
1.1 植物天然产物分离纯化的意义
1.2 植物天然产物分离纯化的策略
1.2.1 植物天然产物分离纯化的特点
1.2.2 分离纯化技术的选择
1.2.3 分离纯化技术的排序
1.2.4 多种组分的分离纯化
1.3 层析法分离纯化植物天然产物
1.3.1 层析法的分类
1.3.1.1 吸附层析
1.3.1.2 正相和反相层析
1.3.1.3 离子交换层析
1.3.1.4 凝胶过滤层析
1.3.1.5 其它层析方法
1.3.2 层析介质的特性和选择
1.3.2.1 常规吸附层析介质
1.3.2.2 大孔吸附树脂
1.3.2.3 反相层析介质
1.3.3 低压组合层析
1.3.3.1 低压液相层析和高效液相层析分离植物天然产物的比较
1.3.3.2 低压组合层析分离纯化植物天然产物
1.4 石杉碱甲和石杉碱乙的性质和提纯
1.4.1 石杉碱甲和石杉碱乙的结构和性质
1.4.1.1 阿尔茨海默症及相关治疗
1.4.1.2 石杉碱甲和石杉碱乙的发现和历史
1.4.1.3 石杉碱甲和石杉碱乙的药理作用
1.4.1.4 石杉碱甲和石杉碱乙及其类似物的结构和性质
1.4.2 石杉碱甲和石杉碱乙的来源
1.4.2.1 石杉碱甲和石杉碱乙的天然来源
1.4.2.2 石杉碱甲和石杉碱乙的合成
1.4.3 石杉碱甲和石杉碱乙的分析
1.4.4 石杉碱甲和石杉碱乙的提纯
1.4.4.1 石杉碱甲和石杉碱乙提纯的一般步骤
1.4.4.2 石杉碱甲和石杉碱乙提取分离工艺中的难点
1.5 本论文研究思路
第二章 石杉碱甲和石杉碱乙分析方法的研究
2.1 引言
2.2 实验材料与方法
2.2.1 实验仪器与试剂
2.2.2 实验方法
2.2.2.1 标准溶液配制及检测波长的确定
2.2.2.2 样品溶液的制备
2.2.2.3 固相萃取
2.2.2.4 色谱条件
2.3 实验结果及讨论
2.3.1 石杉碱甲和石杉碱乙紫外检测波长的确定
2.3.2 HPLC分析方法的确定
2.3.2.1 对照品的测试
2.3.2.2 样品的测试
2.3.2.3 HPLC方法学的考察
2.3.3 固相萃取
2.3.3.1 固相萃取预处理蛇足石杉样品的必要性
2.3.3.2 C18小柱固相萃取方法的建立
2.3.3.3 CBJ-23小柱固相萃取方法的建立
2.3.3.4 固相萃取方法的比较
2.3.4 石杉碱甲和石杉碱乙峰的鉴定
2.3.5 蛇足石杉不同来源样品的测定
2.4 本章小结
第三章 石杉碱甲和石杉碱乙提取工艺的研究
3.1 引言
3.2 石杉碱甲和石杉碱乙的浸提
3.2.1 实验材料与方法
3.2.1.1 实验仪器与材料
3.2.1.2 实验方法
3.2.2 实验结果和讨论
3.3 石杉碱甲和石杉碱乙的初分离
3.3.1 实验仪器与材料
3.3.2 大孔吸附树脂柱层析实验
3.3.2.2 实验方法
3.3.2.3 静态实验
3.3.2.4 动态实验
3.3.3 液液萃取
3.3.4 实验结果与讨论
3.3.4.1 静态吸附实验结果
3.3.4.2 吸附-洗脱条件的确定
3.3.4.3 浸出液分离纯化实验结果
3.3.5 大孔树脂柱层析和液液萃取初分离的比较
3.4 本章小结
第四章 石杉碱甲和石杉碱乙分离纯化工艺的研究
4.1 引言
4.2 硅胶层析纯化石杉碱甲和石杉碱乙
4.2.1 实验材料与方法
4.2.1.1 实验仪器与材料
4.2.1.2 实验方法
4.2.2 实验结果与讨论
4.2.2.1 硅胶柱层析流动相组成的优化
4.2.2.2 硅胶柱层析进料量的优化
4.2.2.3 柱层析淋洗及洗脱速度的优化
4.2.2.4 硅胶柱层析的分离优化结果
4.2.2.5 硅胶柱层析低回收率的原因
4.2.3 小结
4.3 C18反相层析分离石杉碱甲和石杉碱乙
4.3.1 实验材料与方法
4.3.1.1 实验仪器与材料
4.3.1.2 实验方法
4.3.2 实验结果与讨论
4.3.2.1 流动相的优化
4.3.2.2 C18反相层析分离的结果
4.3.3 小结
4.4 PST反相层析分离石杉碱甲和石杉碱乙
4.4.1 实验材料与方法
4.4.1.1 实验仪器与材料
4.4.1.2 实验方法
4.4.2 实验结果与讨论
4.4.2.1 流动相的优化
4.4.2.2 流速的优化
4.4.2.3 进料量的优化
4.4.2.4 PST反相层析分离的结果
4.4.3 小结
4.5 腈基反相层析分离石杉碱甲和石杉碱乙
4.5.1 实验材料与方法
4.5.1.1 实验仪器与材料
4.5.1.2 实验方法
4.5.2 实验结果与讨论
4.5.2.1 流动相的优化
4.5.2.2 流速的优化
4.5.2.3 进料量对石杉碱甲和石杉碱乙分离的影响
4.5.2.4 腈基介质反相层析分离的结果
4.5.3 腈基柱层析对石杉碱甲和石杉碱乙特殊选择性的探讨
4.5.3.1 分离机理的推测
4.5.3.2 分离机理的实验依据
4.5.4 小结
4.6 石杉碱甲和石杉碱乙分离纯化工艺的比较
第五章 低压反相层析工艺的组合
5.1 引言
5.2 实验材料与方法
5.2.1 实验仪器与材料
5.2.2 实验方法
5.2.2.1 PST反相层析进料量的考察
5.2.2.2 腈基柱层析进料量的考察
5.2.2.4 石杉碱甲和石杉碱乙的结晶
5.2.2.5 石杉碱甲和石杉碱乙的鉴定
5.3 实验结果与分析
5.3.1 超载条件下PST和腈基介质的分离效果
5.3.2 分离总碱时腈基介质的进料量
5.3.3 层析工艺的组合
5.3.5 石杉碱甲和石杉碱乙的结晶
5.3.6 组合层析和单步层析结合结晶的分离纯化粗品的比较
5.3.7 低压层析制备石杉碱甲和石杉碱乙的总结果
5.3.8 石杉碱甲和石杉碱乙的结构鉴定
5.3.8.1 石杉碱甲和石杉碱乙的红外光谱
5.3.8.2 石杉碱甲和石杉碱乙的质谱
5.3.8.3 石杉碱甲和石杉碱乙的核磁共振谱
5.4 本章小结
第六章 结论与展望
6.1 本研究工作的总结
6.2 本研究的创新之处
6.3 对下一步工作的展望
参考文献
附录A 图目录
附录B 表格目录
致谢
攻读博士学位期间发表的论文和申请的专利
1.发表论文目录
2.申请发明专利
发布时间: 2006-09-13
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标签：蛇足石杉论文; 石杉碱甲论文; 石杉碱乙论文; 低压组合液相层析论文; 分离纯化论文;