论文摘要
背景：阿尔茨海默病（AD）发病机理至今仍不清楚,研究者提出了多种可能的假说。其中,炎症学说在体内和体外研究中均取得了可信的证据。目前已知,小胶质细胞能够被神经炎性斑的主要成分β淀粉样蛋白（Aβ）激活。迄今为止,人们尚未找到特异性治疗AD的有效方法。海风藤是一种用于治疗跌打损伤、哮喘等疾病的传统中药,最近的研究发现,海风藤提取物能够抑制β淀粉样前体蛋白（β-APP）基因的表达和Aβ的合成,但对小胶质细胞的异常活化是否有影响,国内外尚无类似研究。目的：体外培养小胶质细胞,研究纤丝状和寡聚体β淀粉样蛋白（β-amyloid, Aβ）25-35对小胶质细胞的激活作用,以及海风藤提取物对纤丝状和寡聚体Aβ25-35激活小胶质细胞作用的影响。方法：取新生大鼠的大脑组织,制备成细胞悬液后进行混合细胞培养,再将小胶质细胞从混合培养的细胞群中分离。以CDllb为特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法,鉴定小胶质细胞。分别用纤丝状Aβ25-35、寡聚体Aβ25-35、纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物、纤丝状Aβ25-35+DMSO、寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物以及寡聚体Aβ2535+DMSO干预小胶质细胞,并设立空白对照组。干预48小时后,倒置相差显微镜下观察不同处理组小胶质细胞的形态变化。以CD68作为小胶质细胞活化的特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法,对小胶质细胞的活化进行定性检测,并比较不同处理组间的差异。结果：1)通过CDllb免疫细胞化学染色,证实分离得到的细胞主要为小胶质细胞,CDllb表达阳性率达到98%,而以PBS代替一抗的阴性对照组CDllb表达阳性率仅有5.4%,P<0.05。2)干预48小时后,纤丝状Aβ25-35及寡聚体Aβ25-35组小胶质细胞形态发生明显变化,胞体增大,突起回缩变短,呈阿米巴样改变,为典型的激活后小胶质细胞的形态。而纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物和寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物组的小胶质细胞形态变化则不如上述两组明显。3)CD68免疫细胞化学染色显示,每组小胶质细胞都有一定程度的活化,但各组小胶质细胞表达CD68的阳性率不同,P<0.05。六个实验组的小胶质细胞CD68表达阳性率均高于空白对照组（5.1%）,P<0.004。寡聚体Aβ25-35组的CD68表达阳性率（71.2%）高于纤丝状Aβ25-35组（60.8%）,P<0.002。纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物组CD68表达阳性率（52.1%）低于纤丝状Aβ25-35组（60.8%）,P<0.002。寡聚体Aβ25-35组（71.2%）和寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物组（67.0%）的CD68表达阳性率无明显差异,P=0.005。结论：1)成功进行了小胶质细胞的体外分离纯化培养,该方法获得的小胶质细胞纯度高,能够满足后续实验的要求。2)证实纤丝状Aβ25-35和寡聚体Aβ25-35均能激活小胶质细胞,且寡聚体Aβ25-35激活小胶质细胞的能力强于纤丝状Aβ25-35。3)排除了溶剂DMSO的影响后,证实海风藤提取物能够抑制纤丝状Aβ25-35对小胶质细胞的激活作用,对寡聚体Aβ25-35的激活作用无明显影响。
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标签：小胶质细胞论文; 淀粉样蛋白寡聚体论文; 海风藤提取物论文; 阿尔茨海默病论文;