大鼠脊髓损伤后白介素-1 β诱导凋亡信号传导的研究

论文题目: 大鼠脊髓损伤后白介素-1 β诱导凋亡信号传导的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 病理学与病理生理学

作者: 王新家

导师: 孔抗美

关键词: 脊髓损伤,凋亡,白介素,有丝分裂原激酶

文献来源: 汕头大学

发表年度: 2005

论文摘要: 背景:急性脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经功能丧失的原因除原发性脊髓损害外,继发性SCI也是导致神经功能缺失和影响预后的重要因素。大量的证据显示,急性SCI后发生了继发性损害,主要表现为脊髓组织水肿、变性、坏死,以及神经元和少突胶质细胞凋亡,最终导致神经功能的长期丧失。 白介素-1（IL-1β）作为一种重要的炎性介质,它在创伤性SCI后的继发反应中发挥重要作用。研究表明,脊髓损伤后IL-1β表达明显升高,其可能参与了诱导神经元、少突胶质细胞和星形细胞的凋亡,这种变化与创伤性SCI后随意运动和感觉功能丧失及晚期神经功能障碍有关。但是IL-1β引起体内脊髓神经细胞凋亡的信号传导途径尚不清楚。 目的:为阐明SCI后脊髓组织产生的IL-1β诱导细胞凋亡的分子事件,观察SCI后受损伤的脊髓组织中IL-1β、p38 MAPK和caspase-3表达的变化,以阐明脊髓损伤后IL-1β介导继发性脊髓损害过程中神经细胞凋亡的信号传导分子机制。 材料和方法:取Wistar大鼠162只,随机分为:假手术对照组54只;脊髓损伤组54只;药物干预组:白介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）处理组、SB203580（一种p38MAPK抑制剂）组和生理盐水组各18只。SCI动物模型建立采用Allen’s法进行,用重10 g的铁锤从25 mm高处自由落下,撞击T9、T10硬膜囊,造成急性SCI。药物干预组动物于SCI后立即硬膜下腔内分别注射IL-1Ra（10 microg/10μl）,或SB203580 （4 μG/10μL）,生理盐水组大鼠行硬膜下腔注射生理盐水10μl;假手术组只做T9-T10椎板切除术。采用适时定量RT-PCR、蛋白印迹（Western Blot）、免疫组织化学染色和TUNEL染色等方法,定量地观察实验动物受损伤的脊髓组织中IL-1β mRNA和蛋白表达水平及其对下游分子p38 MAPK和caspase-3表达的变化;并观察大鼠SCI后分别抑制IL-1β和p38 MAPK受体对脊髓损伤大鼠的脊髓组织神经细胞凋亡的作用;采用BBB评分的方法对实验大鼠后肢运动功能进行评估。 结果:适时定量RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学染色法检测均显示,在假手术组大鼠脊髓组织IL-1β mRNA和蛋白表达水平较低,脊髓损伤后30 min IL-1β mRNA和蛋白的表达均明显升高,伤后6 h达高峰,此后逐渐下降,至24 h即恢复正常水平;同时,

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缩略语表

论文部分 大鼠脊髓损伤白介素-1β诱导凋亡信号传导的研究

第一章 前言

第二章 材料与方法

1.1 主要试剂

1.2 主要设备

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物及分组

1.3.2 脊髓损伤动物模型的建立与药物干预

1.3.3 常规病理标本制备

1.3.4 HE染色步骤

1.3.5 免疫组织化学染色步骤

1.3.6 原位末端标记法(TUNEL法)染色步骤

1.3.7 蛋白印迹(Western blot)法

1.3.8 总RNA的提取及RT-PCR

1.3.9 适时定量PCR检测IL-1β mRNA的拷贝数

1.3.10 适时定量PCR(real time PCR)检测Caspase-3 mRNA含量

1.3.11 BBB功能评分

2.4 实验结果的统计学分析

第三章 结果

3.1 脊髓损伤后IL-1βmRNA的表达

3.2 脊髓损伤后IL-1β蛋白的表达水平

3.3 Western blot法检测SCI后磷酸化的p38MAPK水平

3.4 脊髓损伤后caspase-3 mRNA的表达水平

3.5 Caspase-3蛋白水平的检测结果

3.6 TUNEL染色观察脊髓神经细胞凋亡情况

3.7 脊髓损伤后IL-1β介导了p38MAPK磷酸化

3.8 IL-1Ra抑制SCI后Caspase-3表达和减少细胞凋亡

3.9 SB203580减少SCI后细胞凋亡

3.10 BBB评分结果

第四章 讨论

4.1 脊髓损伤后IL-1β在脊髓组织中的表达

4.2 Caspase-3参与IL-1β诱导的细胞凋亡

4.3 p38 MAPK参与IL-1β诱导的细胞凋亡

4.4 抑制IL-1R和p38MAPK减轻神经功能丧失

4.5 结论

参考文献

综述部分

脊髓继发性损伤的机制及其治疗的研究进展

参考文献

附录：在校期间发表论文目录

致谢

发布时间: 2005-09-30

参考文献

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