几种微生物源提取物抑制致病疫霉及其机理的研究

论文摘要

为了更有效地利用微生物源活性物质控制马铃薯晚疫病,本实验首先通过平板对峙拮抗试验从36种（株）微生物中筛选出了16种（株）对致病疫霉菌丝生长有显著抑制作用的微生物,其中B3282（细菌）、枯草芽孢杆菌和A32810（放线菌）这3种微生物的抑菌率均在70%以上,A4228、A32912、A5253和A32914等4种（株）放线菌的抑菌率均在60%以上。然后采用滤纸片法对36种（株）微生物单一发酵液进行抑菌作用的测定,结果表明：仅白菜黑斑病菌、梨黑斑病菌和A32914的发酵液对致病疫霉表现出较强的抑制作用,抑菌率分别为80.51%、70.20%和48.91%。在上述试验的基础上,开展了复合微生物源发酵液对致病疫霉抑制作用的测定,结果表明：供试的不同微生物的发酵液以等体积两两混配后,有1/4的组合抑菌效果介于两者单一使用效果之间,未表现出明显的增效作用；有1/4组合（其它微生物与梨黑斑病菌或白菜黑斑病菌发酵液的组合）表现出了明显的增效作用,特别是浓度为10mg/mL的梨黑斑病菌和白菜黑斑病菌的发酵液混配后抑制作用最显著（抑菌率达90.38%）,明显高于单一发酵液的抑菌效果。此外,研究了单一及复合发酵液对致病疫霉的抑制机理。结果表明：单一和复合发酵液均可导致致病疫霉菌丝出现畸形和原生质浓缩等不正常现象；经处理后的致病疫霉菌丝体中可溶性蛋白含量低于对照,表明单一和复合发酵液均有可能抑制致病疫霉菌体中蛋白质的合成；单一和复合发酵液对致病疫霉游动孢子的释放和休止孢的萌发也均具有很强的抑制作用。最后,探讨了致病疫霉拮抗菌-白菜黑斑病菌和梨黑斑病菌产生的有效抗菌物质。结果显示：白菜黑斑病菌发酵液经121℃高压灭菌20min后,仍可保留72%的抑菌活性,说明发酵液中的抗菌物质具有较强的耐热性；白菜黑斑病菌发酵液经酸碱处理后,在pH2和pHH10下仍可分别保留76%和73%的抑菌活性,说明发酵液中的抗菌物质具有较好的耐强酸、强碱性；抗菌物质在乙酸乙酯和氯仿中的溶解性较大。该发酵液经100%浓度硫酸铵沉淀后所得到的沉淀物质对致病疫霉有明显抑制作用,上清液对致病疫霉无抑制作用；该发酵液的乙醇沉淀物质对致病疫霉无抑制作用,上清液对致病疫霉表现出较好的抑制作用；发酵液直接透析后的袋内物质未对致病疫霉表现出抑制作用。表明白菜黑斑病菌发酵液中的有效抗菌物质可能是蛋白质类物质。梨黑斑病菌发酵液的硫酸铵沉淀和乙醇沉淀对致病疫霉未表现出抑菌效果,两种处理的上清液均对致病疫霉有明显的抑菌作用；梨黑斑病菌菌丝体胞内提取物的饱和（NH4）2SO4沉淀和乙醇沉淀也未对致病疫霉表现出抑制作用,而两种处理得到的上清液对致病疫霉均表现出较好的抑制作用。表明梨黑斑病菌发酵液和菌丝体中的有效抗菌物质均为非蛋白类物质。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 马铃薯晚疫病
• 1.1.1 概述
• 1.1.2 病害症状
• 1.1.3 致病疫霉的生物学特性
• 1.2 生物防治
• 1.2.1 单一制剂
• 1.2.2 复配制剂
• 1.3 微生物源抗菌物质
• 1.3.1 真菌产生的抗菌物质
• 1.3.2 细菌产生的抗菌物质
• 1.3.3 放线菌产生的抗菌物质
• 1.4 马铃薯晚疫病的防治现状
• 1.4.1 选育抗病品种
• 1.4.2 化学防治
• 1.4.3 诱导抗性
• 1.4.4 生物防治
• 1.5 本研究的目的及意义
• 第2章 单一微生物源物质对致病疫霉的抑制作用及机理
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试菌种
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 致病疫霉拮抗菌的筛选-对峙培养法
• 2.2.2 拮抗菌发酵液的制备
• 2.2.3 单一发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 2.2.4 梨黑斑病菌菌丝体粗体物对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 2.2.5 对菌丝形态的影响
• 2.2.6 对菌体中可溶性蛋白含量的影响
• 2.2.7 对游动孢子释放的抑制作用
• 2.2.8 对休止孢萌发的抑制作用
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 致病疫霉拮抗菌的筛选
• 2.3.2 单一发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 2.3.3 几种单一发酵液在不同浓度下对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 2.3.4 梨黑斑病菌菌丝体胞壁提取物对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 2.3.5 对菌丝形态的影响
• 2.3.6 对菌体中可溶性蛋白含量的影响
• 2.3.7 对游动孢子释放的抑制作用
• 2.3.8 对休止孢萌发的抑制作用
• 2.4 讨论
• 第3章 复合微生物源物质对致病疫霉的抑制作用及机理
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 供试菌种
• 3.1.2 培养基、试剂及实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 拮抗菌发酵液的制备
• 3.2.2 复合发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 3.2.3 不同浓度复合发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 3.2.4 对菌丝形态的影响
• 3.2.5 对菌体中可溶性蛋白含量的影响
• 3.2.6 对游动孢子释放的抑制作用
• 3.2.7 对休止孢萌发的抑制作用
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 复合发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 3.3.2 不同浓度复合发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用
• 3.3.3 对菌丝形态的影响
• 3.3.4 对菌体中可溶性蛋白含量的影响
• 3.3.5 对游动孢子释放的抑制作用
• 3.3.6 对休止孢萌发的抑制作用
• 3.4 讨论
• 第4章 致病疫霉拮抗菌拮抗物质的初步研究
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 供试菌种
• 4.1.2 培养基及试剂
• 4.1.3 实验仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 白菜黑斑病菌发酵液中抗菌物质的性质分析
• 4.2.2 白菜黑斑病菌发酵液中有效成分的初步分析
• 4.2.3 梨黑斑病菌发酵液中有效成分的初步分析
• 4.2.4 梨黑斑病菌菌丝体中有效成分的初步分析
• 4.2.5 梨黑斑病菌最佳发酵时间的确定
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 白菜黑斑病菌发酵液中抗菌物质的性质分析
• 4.3.2 白菜黑斑病菌发酵液中有效成分的初步分析
• 4.3.3 梨黑斑病菌发酵液中有效成分的初步分析
• 4.3.4 梨黑斑病菌菌丝体中有效成分的初步分析
• 4.3.5 梨黑斑病菌最佳发酵时间测定结果
• 4.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者发表论文情况
• 致谢