论文摘要
目的：1探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem Cells，BMSCs）的分离、培养和鉴定。2探讨关节软骨脱细胞基质支架材料的改良制备方法。3研究BMSCs复合关节软骨脱细胞基质修复兔全层关节软骨缺损，对修复组织进行评价，评价修复效果，为临床应用软骨组织工程学方法修复软骨缺损提供实验基础和理论依据。方法：1实验动物选用健康的青紫蓝兔24只，3～4月龄，体重2.5—3.5kg，应用贴壁培养筛选法结合密度梯度离心法进行分离BMSCs，并行体外扩增培养。用BMSCs特异性标记抗体和造血细胞特异性标记抗体对分离扩增的细胞进行免疫细胞化学方法鉴定。2以Courtman等提出的四步法为基础的改良法制备关节软骨脱细胞基质，行组织学观察和扫描电镜观察。3 DMEM中加入转化生长因子（TGF-β）、地塞米松、维生素C，将第二代BMSCs悬液，DMEM培养液加入装有适量关节软骨脱细胞支架材料的培养瓶中，体外培养3天，将复合物移植于兔膝关节软骨缺损处。按照完全随机的原则分三组，BMSC和关节软骨脱细胞基质复合体实验组、关节软骨脱细胞基质对照和空白对照组。实验组股骨髁间软骨缺损处（4×3mm）植入BMSC和关节软骨脱细胞基质复合物，对照组单纯植入关节软骨脱细胞基质，空白对照组不作任何植入，分别于术后8周和16周各处死4只动物，对修复组织行大体、组织学及免疫组化染色观察，参照Sellers的关节软骨组织学评分标准对修复组织进行评分，数据输入SPSS10.0软件进行统计分析，比较各组的评分差异是否具有统计学意义。结果：1本实验分离培养的BMSCs形态学特征明显，免疫细胞化学方法鉴定结果为CD44阳性表达，CD34阴性表达。2关节软骨脱细胞基质表面粗糙不平，有弹性，扫描电镜下显示软骨陷窝呈蜂窝状，具有多孔性，未见到残余的细胞核、细胞器。3术后16周BMSC和关节软骨脱细胞基质实验组修复组织呈透明软骨样，表面光滑平坦，与周围软骨及软骨下骨整合良好，而DBM组和空白对照组为纤维性修复和无修复。修复组织大体组织学评分评分结果，BMSC和关节软骨脱细胞基质实验组明显优于DBM对照组和空白对照组（P＜0.05），具有显著性差异。结论：1本实验分离培养所得的BMSCs是可以作为软骨组织工程的种子细胞。2以改良法制备的关节软骨脱细胞基质具有多孔性，除去了细胞核、细胞器，可以作为软骨组织工程较为理想的支架材料。3应用软骨组织工程学的原理，BMSCs复合关节软骨脱细胞支架材料修复全层关节软骨缺损是一种可行的方法。
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标签：骨髓间充质干细胞论文; 脱细胞基质论文; 软骨缺损论文; 修复论文;