论文摘要
STAT4和STAT6是Th0向Th1或Th2分化过程中的两个关键转录因子,他们分别诱导Th1和Th2类细胞因子转录。CBP是核内一种重要的协同激活分子,转录因子需通过竞争与CBP结合而启动基因转录。有研究显示,CBP在STAT4和STAT6介导基因转录过程中均起非常重要的作用,STAT4和STAT6可能就是通过竞争性结合CBP上有限的位点而影响靶基因转录。本试验拟分别构建STAT4,STAT6真核表达质粒（CBP表达质粒由伦敦大学阮雄中教授友情馈赠）,通过分别超表达STAT4或STAT6,研究二者竟争性与CBP结合从而影响Th1/Th2平衡的机制。目的:分别构建STAT4,STAT6重组真核表达质粒,与CBP表达质粒一起按不同比例共转染入COS7细胞,并分别检测游离STAT4或STAT6的量。方法:采用RT-PCR方法从小鼠脾脏组织中扩增STAT4/STAT6基因全长cDNA,T/A克隆到pMD19-T载体中,双酶切后亚克隆入pIRES2-EGFP载体,构建pIRES2-EGFP-STAT4/STAT6质粒,经限制性内切酶鉴定并测序后,与pcDNA3- CBP共转染入COS7细胞,24小时后用Western blot检测细胞裂解液中游离STAT4或STAT6的量。结果:固定CBP和STAT6表达质粒的量不变,随着加入STAT4表达质粒量的增加,细胞裂解液中游离的STAT6蛋白量逐渐增多。同样,固定CBP和STAT4表达质粒的量不变,随着加入STAT6表达质粒量的增加,细胞裂解液中游离的STAT4蛋白量逐渐增多。结论:STAT4与STAT6存在着竞争性与CBP相互结合的现象。
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