论文题目: 中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）及其卫星DNA的启动子鉴定
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 关翠萍
导师: 周雪平
关键词: 双生病毒,中国番茄黄化曲叶病毒,启动子,瞬间表达,转基因,调节
文献来源: 浙江大学
发表年度: 2005
论文摘要: 双生病毒是一类世界范围内广泛发生的植物单链环状DNA病毒,已在多个国家和地区的作物上造成危害,且有逐年加重的趋势。DNAβ是与某些单分体双生病毒相伴随的卫星分子,它能在自然寄主上引起典型症状。迄今发现的所有的DNAβ分子中都存在一个位置和大小都高度保守的βC1基因,它是一种致病决定因子。关于βC1基因启动子的研究,目前还未见报道。中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)是本实验室鉴定的伴随有DNAβ分子的单组分双生病毒,本论文分离鉴定了TYLCCNV-Y10 DNAβ分子上βC1基因的启动子,还研究了病毒和卫星编码蛋白对该启动子的调节作用;同时也分离鉴定了TYLCCNV-Y10的双向启动子。 利用根癌土壤杆菌介导的瞬间表达方法鉴定了TYLCCNV Y10分离物的DNAβ分子上βC1 ORF的启动予。用gus基因做为报告基因,通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性,结果表明,βC1 ORF翻译起始点上游的955核苷酸(nt)片段具有启动子活性;5′端缺失的片段以及A-rich区缺失的片段均保留了启动子活性;3′端缺失的片段没有启动子活性。与花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子相比,955nt片段的启动子活性最高,是35S启动子活性的10～16%。组织化学检测表明,955nt片段能够驱动gus基因在转基因植株的韧皮部细胞特异性表达。进一步的研究表明,翻译起始点上游的173nt具有基础启动子活性并且能够在韧皮部特异性地表达。 将TYLCCNV-Y10互补链编码蛋白及DNAβ的βC1蛋白分别与卫星启动子表达载体在烟草叶片中瞬时共表达,研究互补链蛋白及βC1蛋白对卫星启动子的调节作用。结果表明,互补链蛋白AC1、AC2和AC4均能增强卫星启动子的活性,AC3对卫星启动子的活性没有影响;βC1蛋白能够增强自身启动子的活性。 利用根癌土壤杆菌介导的瞬间表达方法鉴定了TYLCCNV-Y10的双向启动子。通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性,结果表明,病毒链和互补链方向的启动子均能够驱动gus基因表达,而且互补链启动子活性高于病毒链启动子活性。 将TYLCCNV-Y10 DNAβ的βC1蛋白与TYLCCNV-Y10的双向启动子表达载
论文目录:
目录
摘要
Summary
第一章 文献综述
1 启动子概述
1．1 引言
1．2 启动子结构
1．3 启动子研究的意义
2 高等植物启动子研究进展
2．1 引言
2．2 组成型启动子
2．3 组织或器官特异性启动子
2．4 诱导型启动子
3 双生病毒启动子研究进展
3．1 引言
3．2 Mastrevirus启动子
3．3 Begomovirus启动子
3．4 其它属启动子
3．5 问题与展望
4 立题依据
第二章 材料与方法
1 材料
1．1 植物材料
1．2 毒源
1．3 菌株和质粒
1．4 试剂与仪器
1．5 实验用溶液的配制
2 方法
2．1 PCR技术
2．2 PCR产物纯化
2．3 DNA克隆技术
2．4 重组质粒的提取与鉴定
2．5 三亲交配法
2．6 植物总DNA提取(CTAB法)
2．7 植物总RNA提取
2．8 Northern印迹分析
第三章 中国番茄黄化曲叶病毒卫星启动子的鉴定
1 材料与方法
1．1 植物总DNA的制备
1．2 载体构建
1．3 启动子的序列分析
1．4 瞬间表达
1．5 普通烟的转化
1．6 转基因烟草的PCR鉴定
1．7 Northern blot分析
1．8 GUS活性的组织化学染色
1．9 GUS荧光活性分析
2 结果与分析
2．1 卫星启动子的鉴定
2．2 TYLCCNV-Y10互补链编码蛋白对卫星启动子的调节作用
2．3 TYLCCNV-Y10 DNAβ的βC1蛋白对卫星启动子的调节作用
3 讨论
3．1 卫星启动子的鉴定
3．2 病毒互补链编码蛋白对卫星启动子的调节作用
3．3 βC1蛋白对卫星启动子的调节作用
第四章 中国番茄黄化曲叶病毒双向启动子的鉴定
1 材料与方法
1．1 双向启动子的克隆及序列测定
1．2 表达载体的构建
1．3 瞬间表达和GUS活性检测、分析
2 结果与分析
2．1 双向启动子的鉴定
2．2 TYLCCNV-Y10 DNAβ的βC1蛋白对双向启动子的调节作用
3 讨论
3．1 双向启动子的鉴定
3．2 βC1蛋白对双向启动子的调节作用
全文小结
致谢
参考文献
缩略语表
附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器
附录B 实验用溶液及培养基配方
发布时间: 2005-07-22
参考文献
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