论文摘要
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居肿瘤的第二位。对胃癌的早期诊断和治疗是胃癌研究的重大课题。胃癌早期无明显症状,发现时已到晚期,预后极差。以往的胃癌标志物如CEA、CA50等对胃癌的敏感性和特异性较低,早期诊断受到限制。因此,寻找新的组织学、细胞学、血清学的胃癌新抗原,对胃癌诊治的意义重大。本实验室樊代明教授在上世纪八十年代研制出一系列胃癌单克隆抗体,命名为MG系列。其中,MG7-Ag对胃癌的敏感性特异性都很高。后续本实验室及国内医学专家对此进行了一系列相关深入的研究,包括胃癌单克隆抗体MG7对胃癌的诊断、评价预后及动态监测作用、MG7靶向治疗作用、特异性纳米疫苗的制备等等,在国内外发表了几十篇很有影响力的文章。但是,MG7-Ag尚未可知,MG7单抗在国际上的推广及进一步研究受到限制。香港科技大学学者鉴定MG7-Ag为hnRNPA2?B1,但是其性质与我们的以往研究的MG7-Ag不符。本研究使用免疫沉淀、双向电泳、质谱分析等技术鉴定MG7-Ag,对于发现新的癌抗原或癌蛋白,对于胃癌新的分子机制的研究有着不可估量的重要意义。此外,本研究拟建立一个简便的胃癌血清学早期诊断方法,用于胃癌高危人群的普查。MG7单抗对胃癌细胞凋亡作用的研究,为今后的临床药物治疗提供新的思路。总之,本项研究有深刻的理论意义和临床应用前景。【目的】1、免疫组织化学检测MG7-Ag在胃粘膜组织中的表达与分布特点及与临床特征的联系;2、研究MG7-Ag与hnRNPA2/B1的表达区别;3、MG7-Ag的鉴定;4、建立检测MG7-Ag的简便的胃癌血清学早期诊断方法;5、MG7单抗对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响。【方法】1、通过细胞培养技术复苏MG7杂交瘤细胞,制备MG7单抗;2、应用免疫组化技术检测MG7-Ag在胃粘膜组织中的表达与分布特点及与临床特征的联系;3、应用免疫组化技术观察MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌组织中的表达区别;4、应用免疫细胞化学技术和扫描共聚焦显微镜观察MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞中的表达区别;5、通过Western blot技术检测MG7-Ag与hnRNPA2/B1胃癌细胞中的表达区别;6、应用免疫沉淀,Western blot,双向电泳,质谱技术鉴定MG7-Ag;7、通过酶联免疫吸附方法建立检测MG7-Ag的胃癌血清学早期诊断方法;8、通过MG7-Ag的胃癌血清学早期诊断方法检测胃癌,胃癌前病变和其它各种肿瘤病人;9、流式细胞仪检测MG7抗体对胃癌细胞凋亡和细胞周期的影响。【结果】1、MG7-Ag在胃粘膜组织中的表达与分布及与临床特征的联系检测了MG7-Ag在胃粘膜组织（胃癌116例;浅表性胃炎,肠化,增生、萎缩性胃炎等84例）石蜡组织标本中的表达与分布情况,发现MG7-Ag阳性表达率是随着浅表性胃炎,肠化,增生,胃癌,逐渐增高的。MG7-Ag阳性分布:1.腺上皮细胞的胞浆上极和胞膜;2.胃腺腔内。胃癌旁切片染色提示:胃黏膜腺体底部上皮细胞MG7-Ag几乎全部阳性,向顶端方向阳性细胞渐减少,而顶端腔面上皮细胞MG7-Ag又多为阳性。在胃癌患者中,MG7-Ag表达与年龄、性别无关,与分化和临床分期有关。2、MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞中表达存在明显区别我们应用免疫组化技术检测同一胃癌石蜡切块中MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞中的表达,发现MG7-Ag主要分布在细胞膜,细胞核中未见阳性表达,而hnRNPA2/B1主要分布在细胞核中。应用免疫细胞化学技术和扫描共聚焦观察MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞SGC7901,MKN45中的表达区别,发现MG7-Ag主要分布在细胞膜上,细胞核中未见阳性表达,而hnRNPA2/B1主要分布在细胞核中。通过Western blot技术检测MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞MKN45中的区别,MG7-Ag表现为2条带,分子量分别约100KD、120KD;hnRNPA2/B1表现为2条带,分子量分别约34KD、37KD。3、MG7-Ag的鉴定我们通过免疫沉淀方法,将MG7抗体分别与胃癌细胞系SGC7901,MKN45,胃癌组织交联,行单向或双向电泳。与Western blot相匹配的蛋白点从银染或考马斯亮蓝染色的胶中切下,转到离心管中做质谱检测。免疫沉淀的单向电泳,银染的表观分子量为100KD的胃癌组织条带和胃癌细胞系MKN45条带,LC-MS/MS分析鉴定最可能为anti-colorectal carcinoma heavy chain;考马斯亮蓝染色的表观分子量为100KD的胃癌细胞系MKN45条带和SGC7901条带,ESI-MS/MS分析鉴定最可能为anti-human CD19 monoclonal antibody 4G7 immunoglobulin gamma1 heavy chain。免疫沉淀的双向电泳,考马斯亮蓝染色的表观分子量为100KD的胃癌组织条带,MALDI-TOF/TOF分析鉴定为IGHG3 protein。通过Western blot技术,抗人IgG抗体可以与MG7-Ag结合,说明MG7-Ag可能为免疫球蛋白重链样分子。4、研发检测MG7-Ag的胃癌血清学早期诊断方法及应用应用间接酶联免疫吸附方法,生物素-亲和素放大系统,选择合适的包被条件和抗体浓度,检测胃癌手术前后,胃癌前病变和其他肿瘤患者的血清中MG7-Ag。PBS（0.01M）为阴性对照。大于阴性对照的A值的2.1倍为阳性。116例胃癌术前患者的阳性率为83.6%,明显高于胃癌术后（总63例,47.6%）,胃癌前病变（总78例,12.8%）和其它肿瘤组。统计学分析差别有显著意义（P<0.01）。MG7-Ag在其他肿瘤患者血清中也有不同程度的阳性表达,如肺癌（45.2%）,直肠癌（45.5%）,结肠癌（17.6%）,乳腺癌（14.2%）,而子宫癌,淋巴瘤,急性白血病患者中未检测出。胃癌术前患者血清检测MG7-Ag的的阳性表达率随着TNM分期进展逐渐升高:Ⅰ期（总6例,33.3%）,Ⅱ期（总46例,78.3%）,Ⅲ期（总62例,91.9%）,Ⅳ期（总2例,100%）,统计学显示各组间差别有显著意义（P<0.01）;N0（总30例,60.0%）,≥N1（总86例,91.9%）,统计学显示差别有显著意义（P<0.01）。以上结果提示,MG7-Ag是胃癌较特异性的标志,MG7-Ag的表达率随胃癌的进展而升高。间接酶联免疫吸附实验检测患者血清MG7-Ag可以作为胃癌的早期诊断的简便方法。5、MG7单抗对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响。应用流式细胞仪检测MG7单抗对胃癌细胞系KATOⅢ的凋亡影响,发现MG7单抗明显促进胃癌细胞的早期凋亡（P<0.05）。细胞周期检测,MG7单抗主要使胃癌细胞阻滞在G1期。【结论】本研究提示:MG7-Ag的表达水平与胃癌的分期和恶性程度相关,可能在胃癌的发生和进展中起重要的作用;MG7-Ag与hnRNPA2/B1在胃癌细胞表达中存在明显区别,MG7-Ag是hnRNPA2/B1的可能性不大;MG7-Ag可能为免疫球蛋白重链样分子;建立了MG7-Ag的胃癌血清学早期诊断方法,预计有较广阔的应用前景。MG7单抗对胃癌细胞有促进凋亡的作用,对细胞周期的影响主要在G1期。
论文目录
相关论文文献
- [1].玻璃动力学分析方法研究胃癌细胞运动学特点[J]. 诊断学理论与实践 2019(06)
- [2].幽门螺杆菌感染与胃癌细胞侵袭转移的关系研究[J]. 实用癌症杂志 2020(01)
- [3].环状RNA Hsa_circ_0000847在胃癌细胞中的表达变化及其意义[J]. 现代医院 2020(01)
- [4].柠檬苦素抑制胃癌细胞转移的作用及机制研究[J]. 宁夏医科大学学报 2020(04)
- [5].肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌细胞杀伤作用研究[J]. 齐齐哈尔医学院学报 2020(07)
- [6].癌相关成纤维细胞促进胃癌细胞迁移与侵袭[J]. 中山大学学报(医学科学版) 2020(04)
- [7].lncRNA LOXL1-AS1通过靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭、迁移能力[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2020(07)
- [8].自噬相关蛋白4A对胃癌细胞干性及上皮间质转化的影响[J]. 实用医学杂志 2019(16)
- [9].联合靶向阻断miR-29b/92b/106b抑制胃癌细胞生长及迁移[J]. 中国病理生理杂志 2018(11)
- [10].低氘环境对胃癌细胞生长影响的体外实验[J]. 中国应用生理学杂志 2017(01)
- [11].纺锤菌素抑制胃癌细胞的侵袭和转移[J]. 基础医学与临床 2017(05)
- [12].黄连素抑制胃癌细胞分子机制的初步探讨[J]. 广东药科大学学报 2017(04)
- [13].胃癌细胞中CD44阳性细胞具有肿瘤干细胞特征[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2016(04)
- [14].喝米酒能防胃癌[J]. 益寿宝典 2017(13)
- [15].常吃西红柿能防治胃癌[J]. 家庭医药.快乐养生 2017(07)
- [16].养生月报[J]. 科学养生 2017(09)
- [17].细胞因子诱导的杀伤细胞对胃癌细胞的杀伤作用的实验研究[J]. 中华临床医师杂志(电子版) 2013(11)
- [18].蒙药壮西-21体外对胃癌细胞生长的影响[J]. 中国民族民间医药 2019(08)
- [19].一种特异性靶向性淋巴细胞对荷瘤裸鼠的治疗观察[J]. 中国普外基础与临床杂志 2018(03)
- [20].微小RNA-199对胃癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 中国医学科学院学报 2018(04)
- [21].miRNA调控胃癌细胞侵袭和转移的研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘 2017(60)
- [22].叉头框蛋白3过表达对胃癌细胞生物学行为的影响[J]. 中国临床医学 2016(05)
- [23].雌二醇对胃癌细胞周期的影响[J]. 现代肿瘤医学 2015(21)
- [24].缺氧在诱导胃癌细胞上皮间质转化及侵袭中的作用[J]. 现代肿瘤医学 2013(04)
- [25].埃克替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性[J]. 现代肿瘤医学 2013(06)
- [26].胃癌细胞与腹膜间皮相互作进用促腹膜纤维化致腹膜转移的研究[J]. 中国肿瘤临床 2012(22)
- [27].沉默VEGF对胃癌细胞侵袭的影响[J]. 中国卫生产业 2011(26)
- [28].β3Gn-T8的RNA干扰可以有效抑制AGS胃癌细胞的增殖[J]. 中国病理生理杂志 2010(10)
- [29].塞来昔布联合羟基喜树碱对胃癌细胞的生长抑制作用及机制探讨[J]. 徐州医学院学报 2010(12)
- [30].白三烯受体拮抗剂对胃癌细胞VEGF表达影响的实验研究[J]. 中国实验诊断学 2008(01)
标签：胃癌论文; 酶联免疫吸附方法论文; 质谱论文;