苹果生长期多酚组成变化及SPE-HPLC分析测定方法的建立

论文摘要

本文以秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个苹果品种为材料,对苹果果实发育过程中总酚、中性酚、酸性酚、原花青素含量进行了分析。通过大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶LH-20对苹果多酚进行预处理,建立了HPLC测定苹果多酚的检测方法。测定了四个品种苹果多酚中各单酚种类及其含量。为系统研究苹果多酚提供了基础性数据。研究结果表明:1、在苹果的整个生长时期（6月-10月）,总酚、中性酚、酸性酚及原花青素含量均以澳洲青苹最高;其余三个品种在整个生长时期内总酚含量由高到低依次为富士,秦冠,粉红女士;在6月、7月、9月、10月份中性酚含量高低依次为富士,粉红女士,秦冠;在6月、8月、9月、10月酸性酚含量由高到低依次为秦冠,富士,粉红女士。幼果时期（6月）,粉红女士中的总酚、中性酚、酸性酚含量最低,分别为澳洲青苹的62%、57%和57%;原花青素含量以秦冠最低为澳洲青苹的25%。2、各品种苹果中总酚均在6月到7月间下降,随后又开始增加,9月份达最高,果实成熟期（9月-10月）又开始下降。秦冠苹果中性酚果实发育期（6月-8月间）先减少后增加,其它品种苹果中性酚在该发育阶段均呈先增加而后再减少的趋势;粉红女士和澳洲青苹酸性酚随着果实的发育逐渐增加,果实成熟期（9月-10月）又开始减少,秦冠和富士酸性酚一直呈逐渐下降趋势;四个品种苹果中果实发育期随着中性酚和酸性酚的减少,原花青素含量相应逐渐增加,果实成熟期（9月-10月）又开始下降。3、分析苹果生长时期各品种中多酚物质组成的变化,结果表明,随着果实的发育,酸性酚、中性酚及原花青素在总酚中所占比重也发生变化。富士苹果果实发育初期（7月）,中性酚为果渣中主要多酚类物质,占总酚含量的74.7%,而酸性酚和原花青素仅分别占13.79%和11.51%。随着果实发育,中性酚和酸性酚含量逐渐减少,原花青素含量逐渐增加。成熟期（10月）原花青素占总酚比例上升为46.56%,中性酚和酸性酚分别下降为41.23%和12.2%。其它品种也呈相应趋势。4、D4020、LX-1、XDA-5这三种大孔吸附树脂对苹果渣多酚的静态吸附和洗脱试验结果表明,D4020树脂的吸附率和洗脱率均高于其它树脂,试验选择D4020树脂作为多酚初步纯化用树脂。5、大孔吸附树脂初步纯化秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个品种苹果渣多酚得率分别为:63.8%、72.5%、62.1%和79.1%;纯度分别为:23.5%、54.6%、49.8%和57.6%。LH-20进一步纯化秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个品种苹果渣多酚得率分别为:89.5%、88.4%、78.3%和73.8%;纯度分别为:85.1%、99.2%、94.4%和89.3%。6、最终确定中性酚色谱分离条件为:色谱柱insertsil ODS-3 250*4.6mm,柱温25℃、流速1.0mL/min、进样量10μL、检测波长280nm、流动相为醋酸水溶液和乙腈,线性梯度洗脱;酸性酚分离条件:色谱柱insertsil ODS-3 250*4.6mm,柱温25℃、流速0.8mL/min、进样量10μL、检测波长280nm,流动相为醋酸水溶液和乙腈,线性梯度洗脱。7、液相色谱分析结果表明:四个品种苹果HPLC检出中性酚含量均高于酸性酚,中性酚中澳洲青苹的各单酚含量均高于其它品种,秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹中性酚分别占总酚的93.4%、100%、98.4%和99.2%。各品种中单酚均以金丝桃苷最高,分别占秦冠、富士、粉红女士、澳洲青苹所检测总酚的56.06%、83.91%、62.69%、和32.26%。秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹经HPLC检测到总酚含量分别占上样前总多酚的89.5%、95.6%、78.86%和93.28%,经分析,其余未检出物可能为其它原花青素及其聚合物。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1 苹果多酚研究概况
• 1.1 苹果多酚及其性质
• 1.1.1 苹果多酚组成及结构特性
• 1.1.2 苹果多酚的理化性质
• 1.1.3 苹果多酚的功能活性及应用
• 1.2 影响苹果多酚组成及含量的因素
• 1.2.1 品种的影响
• 1.2.2 果实发育过程的影响
• 1.2.3 贮藏条件的影响
• 1.2.4 生长条件的影响
• 1.2.5 果实不同组织的影响
• 1.3 苹果多酚国内外研究状况
• 1.3.1 苹果多酚提取方面
• 1.3.2 分离纯化方面
• 1.3.3 功效研究方面
• 2 苹果渣研究概况
• 2.1 苹果渣资源概况
• 2.2 苹果渣组成及化学成分分析
• 2.2.1 苹果渣中矿物质和微量元素含量
• 2.2.2 苹果渣中各种氨基酸的含量
• 2.2.3 苹果渣中各种重金属及农药残留的含量
• 2.2.4 苹果渣综合利用情况
• 3 本课题研究的目的与意义
• 第2章 正文
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试验原料
• 1.2 试验材料与试剂
• 1.3 试验仪器与设备
• 2. 研究内容与方法
• 2.1 总多酚测定方法研究
• 2.1.1 （FC）试剂的配制
• 2.1.2 没食子酸标准溶液的配制
• 2.1.3 没食子酸标准曲线的建立
• 2.2 原花青素测定方法的研究
• 2.2.1 显色剂的配制
• 2.2.2 儿茶素标准溶液的配制
• 2.2.3 儿茶素标准曲线的建立
• 2.3 苹果渣多酚的提取方法研究
• 2.3.1 苹果渣多酚提取工艺
• 2.3.2 超声波辅助提取法
• 2.3.3 果渣干燥方式的筛选
• 2.4 不同品种苹果不同生长时期苹果渣中多酚物质含量变化的研究
• 2.4.1 苹果品种、采样时间及样品处理方法的确定
• 2.4.2 总酚的提取测定
• 2.4.3 原花青素含量的测定
• 2.4.4 中酚含量的测定
• 2.4.5 酸酚含量的测定
• 2.5 不同品种苹果渣多酚的分离纯化研究
• 2.5.1 大孔吸附树脂初步纯化苹果多酚的工艺研究
• 2.5.2 SephadexLH-20进一步分离纯化苹果多酚的工艺研究
• 2.6 苹果多酚高效液相色谱（HPLC）检测方法的建立
• 2.6.1 样品制备
• 2.6.2 标准溶液的配置
• 2.6.3 色谱条件的确定
• 2.6.4 定性分析
• 2.6.5 标准曲线制作
• 2.6.6 定量分析
• 2.6.7 重复性试验
• 2.6.8 精密度试验
• 2.7 苹果渣中多酚纯化物的抑菌活性研究
• 2.7.1 供试菌株的准备
• 2.7.2 培养基的配制并制备平板
• 2.7.3 样品溶液的制备
• 2.7.4 供试菌株悬浮液的制备
• 2.7.5 苹果渣中多酚纯化物抑菌作用的定性实验
• 2.7.6 最低抑菌浓度实验
• 2.7.7 不同pH值对苹果渣中多酚纯化物的抑菌活性的影响实验
• 2.7.8 苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的热稳定性试验
• 3 结果与分析
• 3.1 总多酚测定（FC法）标准曲线
• 3.2 原花青素测定标准曲线
• 3.3 苹果渣多酚的提取方法研究
• 3.4 不同品种苹果不同生长时期苹果渣中多酚物质含量变化的研究
• 3.4.1 同时期不同品种中各多酚含量变化
• 3.4.2 不同品种苹果渣中各多酚物质在果实发育过程中的变化
• 3.4.3 果实发育过程中各品种中多酚物质组成的变化
• 3.5 分离纯化结果
• 3.5.1 大孔吸附树脂初步纯化苹果多酚试验结果
• 3.5.2 四种苹果渣多酚Sephedex LH-20进一步纯化洗脱曲线
• 3.5.3 四种苹果渣多酚分离纯化纯度及得率
• 3.6 HPLC测定结果
• 3.6.1 色谱柱的选择
• 3.6.2 检测波长的选择
• 3.6.3 流动相的选择
• 3.6.4 流速对分离度的影响
• 3.6.5 柱温对分离度的影响
• 3.6.6 进样体积对分离度的影响
• 3.6.7 色谱条件的确定和定性分析
• 3.6.8 标准曲线制作
• 3.6.9 重复性试验
• 3.6.10 精密度测定
• 3.6.11 定量分析
• 3.7 苹果渣中多酚纯化物的抑菌活性研究
• 3.7.1 苹果渣中多酚纯化物对不同菌株的抑制作用
• 3.7.2 苹果渣中多酚纯化物最低抑菌浓度试验
• 3.7.3 pH值对苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的影响
• 3.7.4 苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的热稳定性研究
• 第3章 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间研究成果
• 致谢