耶氏肺孢子虫肺炎实验及临床诊断研究

论文摘要

目的:采用瑞氏-吉姆萨染色法、巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫,比较这两种方法在耶氏肺孢子虫肺炎诊断中的敏感性和稳定性,并结合病人的临床表现探讨肺孢子虫肺炎的临床诊断方法。方法:收集艾滋病、肾移植、肺癌、支气管炎等患者的痰液、气管分泌物、支气管肺泡灌洗液（BLA）或肺组织标本,采用瑞氏-吉姆萨染色法检测痰、BALF涂片和肺印片等标本中的耶氏肺孢子虫;以Pc-ITS为引物,对肺组织、BALF和痰标本,采用巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫DNA。通过文献检索统计国内PCP发病情况:性别及年龄比例、发病特点、地区分布等,结合本研究发现的PCP病人资料,分析总结耶氏肺孢子虫肺炎的临床诊断方法。结果:瑞氏-吉姆萨染色法对该虫的检出率为32.39%,巢氏PCR法对该虫DNA的检出率为61.97%,二者检出率比较,x2=11.30,p＜0.01,有显著意义。文献检索发现2001～2007年国内PCP病例,以AIDS并发PCP为主（82.10%）;男性多于女性;死亡率13.08%,死亡病人中AIDS并发PCP病人占97.37%;PCP发病地区主要在河南、广西、湖南、广东等地;本研究确诊耶氏肺孢子虫肺炎6例,男5例,女1例,治疗后均好转出院。结论:瑞氏-吉姆萨染色法,操作简便,但敏感性偏低。巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫敏感性高于瑞氏-吉姆萨染色法,其特异性和敏感性也优于普通的单一引物PCR法,本研究首次在青岛地区采用巢氏PCR法检出AIDS病人并发耶氏肺孢子虫,所用引物PC-ITS对耶氏肺孢子虫高度敏感,适用于临床病人的检测,结果准确快捷,值得推广。我国目前PCP发病人群以AIDS并发PCP为主,根据国内外资料综述及我们在本研究中对PCP阳性病人的分析,符合以下标准可诊断为AIDS并发PCP:①HIV感染;②CD4+小于200/μl;③有发热、咳嗽,咳痰,伴呼吸急促、进行性呼吸困难、紫绀,血氧饱和度下降;④胸片示间质性肺炎改变,或/及CT肺部示毛玻璃状改变;⑤复方新诺明治疗有效。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 临床标本的采集
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验方法
• 1.2 病原学检测
• 1.2.1 瑞氏—吉姆萨染色法
• 1.2.2 苏木素—伊红染色法
• 1.3 巢氏PCR法检测
• 1.3.1 引物合成
• 1.3.2 模板DNA的制备
• 1.3.3 巢氏PCR反应
• 1.3.4 琼脂糖凝胶电泳
• 1.4 临床资料的采集
• 1.4.1 一般资料
• 1.4.2 实验室检查
• 1.4.3 影像学检查
• 1.5 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 病原学检测
• 2.1.1 瑞氏—吉姆萨染色法
• 2.1.2 苏木素—伊红染色法
• 2.2 巢氏PCR检测
• 2.3 两种方法检测结果比较
• 2.4 两种标本巢氏PCR检测结果比较
• 2.5 结合临床表现诊断肺孢子虫肺炎
• 2.5.1 国内PCP发病情况
• 2.5.2 本次研究的情况
• 第三章 讨论
• 3.1 瑞氏—吉姆萨染色法对耶氏肺孢子虫的检测
• 3.2 巢氏PCR法对耶氏肺孢子虫的检测
• 3.3 耶氏肺孢子虫肺炎的临床诊断及治疗
• 3.4 标本采集的注意事项
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 综述的参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢