纳米液态氟碳微球超声造影剂的制备及体外寻靶实验研究

论文摘要

第一部分纳米液态氟碳微球超声造影剂的制备及体外聚集显影实验研究目的:制备一种新型超声造影剂—纳米液态氟碳微球超声造影剂,并研究其体外基本特性及聚集后增强超声显影性能,为其今后血管外超声靶向显像的研究提供依据。方法:采用旋转蒸发和高压均质技术制备一种纳米液态氟碳微球超声造影剂,观察其外观、形态、大小及分布情况,计算其浓度,并测定其粒径、电位。进一步制备生物素化微球,并以空白微球作为对照组,分别在加入亲和素前后,观察体外聚集情况及超声显影效果,再采用DFY-II型超声图像定量分析统计软件计算、比较超声图像平均灰度值。结果:所制备的液态氟碳微球造影剂外观呈乳白色的混悬液,镜下观察,微球形态圆整,大小均一,性质稳定,粒径在170 nm左右;制备的生物素化微球在加入亲和素前未见聚集反应,不能增强超声显影,加入亲和素后可微球发生明显的聚集,并于体外明显增强超声显影,经DFY-II型软件分析,加入亲和素前后超声图像平均灰度值差异有统计学意义。结论:成功制备出稳定的纳米液态氟碳微球超声造影剂,并采用生物素亲和素法证明了该微球具有聚集后增强超声显影性能,为后期血管外超声靶向显影奠定基础。第二部分肝癌靶向液态氟碳微球体外寻靶实验研究目的:制备NBD标记的生物素化液态氟碳微球,并将抗人肝癌细胞单克隆抗体HAb18生物素化,采用生物素亲和素三步法,进行体外靶向结合的研究。方法:利用旋转蒸发和高压均质技术制备NBD标记的生物素化液态氟碳微球造影剂,于荧光显微镜下观察其形态、大小及荧光标记情况;制备生物素化抗人肝癌细胞单克隆抗体HAb18,用HABA/Avidin试剂盒检测抗体的生物素化程度,用细胞ELISA法检测其免疫活性;培养7721肝癌细胞,采用生物素亲和素三步法,进行微球体外靶向结合实验。结果:所制备的NBD标记的生物素化液态氟碳微球外观呈乳白色的混悬液,荧光显微镜下观察,微球发明亮的绿色荧光;单抗HAb18生物素化后每分子抗体可结合的生物素数目平均为14个,其免疫活性也未见明显降低;采用生物素亲和素三步法,NBD标记的生物素化液态氟碳微球可靶向结合到7721肝癌细胞上。结论:成功制备出NBD标记的生物素化液态氟碳微球及生物素化单抗HAb18,并通过生物素亲和素三步法将其特异结合到7721肝癌细胞上。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 纳米液态氟碳微球超声造影剂的制备及体外聚集显影实验研究
• 第一节 液态氟碳微球超声造影剂的制备
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 第二节 液态氟碳微球超声造影剂的体外聚集显影实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 第三节 讨论
• 第二部分 肝癌靶向液态氟碳微球的体外寻靶实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文、参研项目、参加会议等情况